多杀菌素微乳注射剂在新西兰兔体内的药代动力学研究_图文

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2024年5月3日发(作者：)

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第４期　９７　

多杀菌素微乳注射剂在新西兰兔体内的　

药代动力学研究　

钟恬田，黎博宇，赵建国，杨雨辉，兰坚强，龚帮俊，韩

（海南大学热带农林学院，海南海口５７０２２８）　

谦　

摘要：为了解自制１％多杀菌素微乳注射剂在新西兰兔体内的药代动力学规律，采用ＥＬＩＳＡ和ＨＰＬＣ两种不同检测方　

法，分别分析血清和血浆中的药物浓度，ＰＫｓｏｌｖｅｒ软件非房室模型计算药代动力学参数。结果：高效液相色谱法和酶联免疫　

吸附测定法检测药物代谢动力学主要参数分别为：达峰时间Ｔｍａｘ为（４．００±０．００），（２．６７±０．６７）ｈ，峰浓度Ｃｍａｘ为　

（３６３．２５－ｉ－１３．３９）ｎｇ／ｍＬ，（２８２．１９±２４．５９）ｎｓ／ｍＬ；半衰期ｔ，／２为（８１．２４±１０．８０）ｈ，（７０．６１±１５．３８）ｈ；药时曲线下面积ＡＵＣ　

为（１７．５２±１　２４）／ｘｇ·ｈ／ｍＬ，（１７．３９±２．３８）　·ｈ／ｍＬ。相同注射方式，相同剂量的两种检测方法之间比较，血药浓度变化　

趋势基本一致，但实测数据蜂浓度Ｃｍａｘ差异显著（Ｐ＜０．０５），其余参数差异不显著（ｐ＞Ｏ．０５）。结论：新西兰兔皮下注射多　

杀菌素吸收快速，消除缓慢，药物作用半衰期长，可在体内持续发挥药效。　

关键词：多杀菌素；微乳注射液；药代动力学；新西兰兔　

中图分类号：￥８５９．７　文献标志码：Ａ　文章编号：０５２９—６００５（２０１８）０４—００９７—０３　

Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａ　ｓｐｉｎｏｓａｄ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｉｎＮｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｒａｂｂｉｔｓ　

ＺＨＯＮＧ　Ｔｉａｎ—ｔｉａｎ，ＬＩ　Ｂｏ—ｙｕ，ＺＨＡＯ　Ｊｉａｎ—ｇｕｏ，ＹＡＮＧ　Ｙｕ—ｈｕｉ，ＬＡＮ　Ｊｉａｎ—ｑｉａｎｇ，ＧＯＮＧ　Ｂａｎｇ－ｊｕｎ，ＨＡＮ　Ｑｉａｒｔ　

（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｈａｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｉｋｏｕ　５７０２２８，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｓｐｉｎｏｓａｄ　ｍｉｅｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ａｔ　ａ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　

０．２５　ｍｇ／ｋｇ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ．Ｔｗｏ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ａｓｓａｙｓ，ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏ－　

ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＰＫｓｏｌｖｅｒ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｎｏｎ—ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　

ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｕｎｄｅｒ　ＨＰＬＣ　ａｎｄ　ＥＬＩＳＡ　

ｗｅｒｅ　ａｓ　ｏｆｌｌｏｗｓ：ｐｅａｋ　ｔｉｍｅ　Ｔｍａｘ（４．００±０．００），（２．６７±０．６７）ｈ，ｐｅａｋ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　Ｃｍａｘ（３６３．２５土１３．３９），（２８２．１９±　

２４．５９）ｎｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｈａｌｆ—ｌｉｆｅ　ｔ１／２　ｗａｓ（８１．２４　４－１０．８ｏ）ａｎｄ（７０．６１±１５．３８）ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　Ｔｈｅ　ｒａｅａ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　

ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ＡＵＣ　ｏｆ（１７．５２±１．２４）ａｎｄ（１７．３９±２．３８）　ｇ·ｈ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　

ｓａｍｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｎａｄ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｄｏｓｅ，ｔｈｅ　ｔｒｅｎｄ　ｏｆ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ａｓｓａｙｓ，ｂｕｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｅｔｕ－　

ａｌ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｖａｌｕｅ　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｈｔｅ　ｐｅａｋ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　Ｃｍａｘ，ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｈａｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｒｅｍａｉｎｉｎｇ　ｐａ２　

ｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＞０．０５）．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ：ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｉｎｏｓａｄ　ｈａｓ　ｆａｓｔ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，　

ｓｌｏｗ　ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａ　ｌｏｎｇ　ｈａｌｆ—ｌｉｆｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ｔｈａｔ　ｃａｌｌ　ｔａｋｅ　ｉｎｔｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｒａｓｉｔｅ　ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｆｏｒ　ａ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｐｉｎｏｓａｄ；ｍｉｅｒｏｅｍｕｌｓ

ｉｏｎ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ；Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　ｒａｂｂｉｔｓ　

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＨＡＮ　Ｑｉａｎ　

多杀菌素（Ｓｐｉｎｏｓａｄ）是２０世纪９Ｏ年代初期开　

后产生的胞内次级代谢产物　１　Ｊ。相比其他杀虫药　

发的一类大环内酯类抗生素，是由土壤中的放线菌　

物，多杀菌素有着独特的作用机制，主要是通过作　

刺糖多孢菌（ＳａｃｃｈａｒｏｐｏＬｙｓｐｏｒａ　ｓｐｉｎｏｓａ）经有氧发酵　

用于烟碱型乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ），极大地延长乙　

酰胆碱（Ａｃｈ）的作用时间　Ｊ。多杀菌素具有高效　

收稿日期：２０１８一Ｏ１—０９　

低毒、高选择性等优点，介于以上这些优点，该药于　

基金项目：国家重点科研计划（２０１７ＹＦＤ０５￣１２００）；２０１７年海　

１９９９年赢得“美国总统绿色化学挑战奖”ｌ４　Ｊ。近年　

南大学团队项目支持（ｈｄｋｙｔｇ２０１７０２）　，　

来，越来越多的人饲养宠物，研究发现多杀菌素对　

作者简介：钟恬田（１９９４～），女，硕士，从事兽药剂型研究，Ｅ—　

ｍａｌｌ：３５３６１２２４２＠ｑｑ．ＣＯＨＩ　

猫、狗、羊、牛等家畜的蚤类、蜱、虱子等体外寄生虫　

黎博宇（１９９５一），男，本科，从事兽药剂型研究，Ｅ—ｍａｉｌ：　

有较好的防制作用，多杀菌素的用途越来越广　

５６２９０３８ｏ９＠ｑｑ．ｔｏｍ　

泛　。但该药难溶于水，口服吸收差，有较大的首过　

注：黎博宇与钟恬田对本文具有同等贡献　

效应，且体内的半衰期短，这些性质严重削弱了多杀　

通讯作者：韩谦，Ｅ—ｍａｉｌ：ｑｉａｎｈａｎ＠ｈａｉｎｕ．ｅｄｕ．ｅｌ３　

菌素口服制剂药效的发挥。多杀菌素微乳液具有热　

９８　中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第４期　

力学稳定性，可进行热压灭菌，其黏度较低，注射时刺　

激Ｉ生小，且可以解决其难溶性的问题，药物从乳剂的　

油相中缓慢释放，可以适当延长持效期、减少用药量　

且降低给药次数，大大地提高生物利用度和药效　］。　

本试验分别采用了酶联免疫吸附测定方法　

（ＥＬＩＳＡ）和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）两种检测方法　

探索家兔皮下注射多杀菌素微乳注射剂后兔血液　

中药物的药代动力学规律，为临床应用该新剂型治　

疗相关疾病提供部分参考理论依据。　

１仪器与材料　

１．１仪器高效液相色谱仪（日本岛津公司ＬＣ一　

２０ＡＤ）；氮气吹扫仪（北京优晟联合科技有限公司　

ＵＧＣ一４５）；超声波清洗机（深圳市超艺达科技有限　

公司Ｐｓ一４０）；高速离心机（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　ＡＧ　２２３３１）；　

磁力搅拌器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司　

ＧＬ一３２５０Ａ）；电子天平（梅特勒一托利多仪器有限　

公司ＭＥ２０４Ｅ）；超低温冰箱（海尔ＢＤ一２２６Ｗ）；微　

型漩涡仪（上海泸西分析仪器厂有限公司ＸＷ～　

８０Ａ）；酶标仪（美国伯腾仪器有限公司Ｅｌｘ８０８）；洗　

板机（北京拓普分析仪器有限公司ＤＥＭ一３）。　

１．２药品及试剂　多杀菌素标准品（纯度９８．５％，　

由中国农业大学生物学院宋渊教授提供）；油酸乙酯　

（山东西亚化学股份有限公司）；吐温８０（麦克林）；丙　

二醇（广州化学试剂）；甲醇（美国Ｔｅｄｉａ公司）；乙腈　

（美国Ｔｅｄｉａ公司）；乙酸乙酯（广州省化学试剂工程　

技术公司）；异戊醇（广州化学试剂）；肝素钠（生工生　

物工程有限公司）；酒精；超纯水；０．２２　ｍ微孔滤膜。　

１．３动物健康新西兰兔６只，体重１．８—３．７　ｋｇ，　

雌雄各半，购自某新西兰兔养殖场，饲养于海南大　

学动物房饲养室。试验前自饲养２周，且未服用任　

何可能影响本品代谢吸收的药物，血液生化指标检　

查均正常。采样期间正常饲养，不限制饮水。　

２试验方法　

２．１　多杀菌素的微乳制备　多杀菌素自乳化的处　

方含１％多杀菌素原药，由海南大学热带动物医学　

与病媒介生物学实验室研制。该剂型为澄清透明　

的液体，微带淡蓝色乳光，流动相较好，该处方所选　

用的辅料均无毒性。该制剂显著提高了多杀菌素　

在水中的的溶解度，将其制成自乳化制剂后，一方　

面不仅可以提高药物溶解度，而且制剂在体内可自　

发形成Ｏ／Ｗ型微乳液，促进药物吸收，且大大拓宽　

了该药的给药途径。　

２．２给药方法和血样采集兔子分别编号为１～６　

号，所有兔子均按照０．２５　ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ剂量，皮下注射　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

给药，并在给药前０．５　ｈ由耳缘静脉采集空白血样５　ｍＬ，　

在给药后的０．５，１．０，２．０，４．０，８．０，１２．０，２４．０，４８．０．　

９６．０，１４４，１９２，２４０，３３６　ｈ采集血样１　ｍＬ。１、３、５号兔血　

采集后迅速置于含肝素抗凝的离心管中，３　５００　ｒ／ｒａｉｎ　

离心１０　ｍｉｎ，吸取上层血浆转入另一离心管中，置　

于一２ｏ　冰箱内保存；２、４、６号兔血采集后置于空离　

心管中，３７　下放置２　ｈ，将析出的血清转移到另一离　

心管中，置于一２０℃冰箱内保存。整个试验期间，严密　

观察兔子的精神状态和临床反应，包括食欲，饮水状　

况，大小便和可能出现的胃肠道等方面的不良反应。　

２．３酶联免疫吸附测定方法测定血清中药物浓度　

向９６孔板中加入２００　由包被缓冲液稀释的多杀菌　

素包被原（多杀菌素一ＯＶＡ），并于３７℃孵育３　ｈ。使　

用ＰＢＳＴ溶液洗板３次后，每孔加人２００　脱脂牛奶　

封闭０．５　ｈ。洗板后每孔加入１００　标准品或待测样　

品，随后加入１００　ｍＡｂ，于３７℃竞争１　ｈ。竞争结　

束后弃反应液，洗板３次，每孔加入２００　的ＰＢＳＴＧ　

稀释的羊抗鼠二抗（ＩｇＧ—ＨＲＰ）溶液，于３７　ｑＣ孵育　

０．５　ｈ。洗板后每孑Ｌ加入２００　Ｌ　ＴＭＢ底物显色液，　

室温孵育１５—２０　ｒａｉｎ，加入１００　终止液（２　ｍｏＬ／Ｌ　

Ｈ　ＳＯ　），用酶标仪在４５０　Ｉ１１＇１＇１处读取吸光度。　

２．４高效液相色谱法测定血浆中药物浓度　

２．４．１色谱条件色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ　Ｃ１８（４．６　ｍｍ　ｘ　

２５０　ｍｍ，５　ｍ）；流动相：甲醇一乙腈一水（４９：４９：　

２），使用前经超声混匀备用；体积流量：１．０　ｍＬ／　

ａｒｉｎ；检测波长：２４６　ｎｍ；柱温：４０℃；进样量：１０　ｔｘＬ　

２．４．２　标准曲线的配制　精密称取多杀菌素　

０．Ｏ１　ｇ标准品，用甲醇配成０．１　ｍｇ／ｍＬ的标准溶　

液，使用甲醇逐级稀释为４００，２００，１００，５０，２５，１２．５　

ｎｇ／ｍＬ的梯度浓度溶液，经ＨＰＬＣ检测，用峰面积Ａ　

对浓度ｃ（ｎｇ／ｍＬ）作线性回归，结果表明，多杀菌素　

在１２．５～４００　ｎｇ／ｍＬ内线性关系良好（Ｒ＝０．９９９９）。　

２．４．３血浆样品前处理方法筛选　吸取适量的兔　

空白血浆，加入一定量的标准液，配制为终浓度为　

０．０２５　ｍｇ／ｍＬ的血浆样品１　ｍＬ，分别经加入样品量　

４倍、３倍、３倍的甲醇、乙腈、乙酸乙酯，漩涡１０　ｒａｉｎ　

后，１００００　ｒ／ｒａｉｎ离心１０　ｒａｉｎ，吸取上清液于另一试　

管中，于４０℃下氮气吹干，残渣复溶于１　ｍＬ乙腈　

中，过滤膜后经紫外检测器检测浓度，经３次重复试　

验后，测出峰面积并计算其萃取回收率。萃取回收　

率＝（血浆中药物的峰面积／对应浓度非血浆中的　

药物的峰面积）×１００％最终选择乙腈蛋白沉淀法　

作为前处理方法，平均萃取回收率可达８６．７７％，提　

取方法可靠。实际测量未知浓度血浆时，应尽可能　

通过氮气吹扫的方法，使样品浓缩，从而减小误差。　

２．４．４加标回收率试验将１　ｍｇ／ｍＬ标准品储备　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　

液，用空白血浆稀释配置成０．０２５、０．２、０．８　ｍｇ／ｍＬ　

这３个浓度的待测样，经２．４项操作后计算回收率　

和１３内、Ｅｌ间精密度，每种溶液３个重复。由标准曲　

线求得各样品的浓度，将求得浓度与已知加入浓度　

相比，回收率＝（所算浓度／已知浓度）Ｘ　１００％。其　

回收率分别为９４．５％，表明该方法回收率符合要　

求；其Ｅｔ内和Ｅｔ间的精密度的相对标准偏差ＲＳＤ值　

分别为１．０６％，１．５７％。结果表明，本试验条件下　

所用方法的精密度符合要求，测定方法可靠。　

２．５数据分析处理采用基于ＥｘｃｅＬ的药动学数据　

分析程序一ＰＫｓｏＬｖｅｒ　１．０的非房室模型来处理药动数　

据，分别计算出每只新西兰兔的药动学参数，然后计算　

平均值及标准误，并对两种分析方法下的数据进行ｔ检　

验分析，同时以血药浓度平均值对时间作药一时曲线。　

３　结果　

血药浓度曲线和药物动力学参数６只家兔单次　

皮下注射多杀菌素微乳剂后分别经高效液相色谱方法　

和ＥＬＩＳＡ方法检测下不同时间下的血药浓度曲线见图　

１，将药一时数据输入药动学计算软件ＰＫｓｏｌｖｅｒ，采用非　

房室模型对数据进行处理，确定药动力学参数　。其　

中Ｃｍａｘ和Ｔｍａｘ为实测值，其结果见表ｉ。　

表１　新西兰兔皮下注射多杀菌素注射液（０．２５　ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ）　

后的药物动力学参数（ｎ＝６）　

，、　

蠢　

０　５０　１００　１５０　２００　２５０　３００　３５０　

时间／ｈ　

图１分离菌１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列ＰＣＲ扩增　

产物的琼脂糖凝胶电泳结果　

中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第４期　９９　

４讨论　

４．１　检测方法的建立　本试验中采用了两种方法　

检测家兔血液中多杀菌素的含量。经查阅国内外　

相关文献后，首先建立了检测血浆中多杀菌素的提　

取方法，通过对常用样品前处理方法：蛋白沉淀法，　

液液萃取法的比较筛选，最终选择乙腈作为蛋白沉　

淀剂对血浆进行处理。其次建立了多杀菌素含量　

的检测方法，所用的多杀菌素液相检测方法的标准　

曲线Ｒ大于０．９９，日内与日问变异系数ＲＳＤ值小　

于９％，血浆中的内源性物质不干扰多杀菌素的测　

定，实现了主峰与杂质峰的良好分离，满足药动学　

测定的要求。同时，通过制备多杀菌素单克隆抗　

体，从而通过间接竞争ＥＬＩＳＡ反应的方法检测血清　

中的多杀菌素含量，该检测方法的标准曲线Ｒ大于　

０．９９，加标曲线回收率可达到稳定在９０％以上，同　

样可满足药动学测定的要求。其中，ＥＬＩＳＡ分析方　

法操作方便、灵敏、检测限低、而液相方法准确、重　

现性好，但需要通过前处理方法将待测样品提纯后　

再进行检测。　

４．２药动学特征　液相色谱法及酶联免疫法检测　

药物浓度的半衰期、达峰时间，药时曲线下面积、平　

均滞留时间等主要药代动力参数均无显著差异，通　

过两种方法对血液样品的检测，可知多杀菌素在　

２～４　ｈ达到最大血药浓度，而后快速降低，而多杀菌　

素原药在口服给药后的２～８　ｈ到达峰浓度，两者相　

比较，微乳注射剂起效更快，可作为动物急性疾病的　

治疗方案。在家兔体内的药代参数值与在狗体内的　

相比，动物体内代谢可见相似的趋势特征，但仍存在　

一

定的种属差异，主要表现在药物半衰期在兔体内时　

间略短于在狗体内　Ｊ，这可能跟动物胃部ｐＨ值存　

在一定的联系，该制剂在新西兰兔体内分布广泛，　

持续时问较长。本试验中家兔按０．２５　ｍｇ／ｋｇ·ｂｗ，　

一

次皮下注射后，３０　ｍｉｎ后血浆中多杀菌素即可达　

到１８７．１３．ｇ／ｍＬ，６０、９０　ｍｉｎ分别达到２２８．４７、　

３ｌ８．９５　ｎｇ／ｍＬ，至４８，９６　ｈ之后血浆中药物浓度维　

持在９４．９８、７１．２８　ｎｇ／ｍＬ。在该制剂的药效预试验　

中可证明该给药剂量可对多种体内外寄生虫，比如　

虱子、螨虫、肠道线虫等起到有效的防制作用。　

４．３　制剂特点　微乳作为一种新型的给药系统，大　

大增加了多杀菌素的溶解性，降低了在给药过程中　

对动物的刺激性和毒性。同时，微乳具有不良反应　

小，容易被机体代谢，可供注射使用的优点。多杀　

菌素微乳注射剂质地较稀，黏度不高，在注射剂过程　

（下转第１０３页）　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第４期１０３　

１３５　ｇ／ｍＬ范围内细胞增殖作用显著（Ｐ＜０．０５）。　

作用４８　ｈ效果最为明显。因此本试验选取２０　０ｅ／ｍＬ、　

参考文献：　

［１］颜赞，王建伟，秦永彪，等．中药免疫增强剂研究现状［Ｊ］．养　

禽与禽病防治，２０１３（７）：２—４．　

４０　ｍＬ、８０　ｇ／ｍＬ三个浓度作为探讨铁皮石斛　

协同ＣｏｎＡ、ＬＰＳ刺激小鼠脾脏Ｔ、Ｂ淋巴细胞体外作　

用的最佳浓度。对于小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞而言，３　

个铁皮石斛浓度均能促进免疫抑制组小鼠脾淋巴　

细胞的增殖（Ｐ＜０．０５），其中浓度为２Ｏ　ｇ／ｍＬ时，　

小鼠淋巴细胞的增值效果最佳，表明铁皮石斛能够　

协同ＣｏｎＡ促进免疫抑制小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增　

［２］帅起义，赵俊龙，叶培根．中药免疫增强剂（维康）对母猪免疫　

应答及生产性能的影响［Ｊ］．湖南农业科学，２０１１（１１）：　

１３４—１３６．　

［３］　张桂枝，靳双星．复方中草药免疫增强剂对仔鸡免疫效果的影　

响［Ｊ］．中国兽医杂志，２０１ｌ，４７（５）：５０—５２．　

［４］耿文学，唐波，华涛，等．免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免　

殖，增强机体的细胞免疫功能。对照组中，不同浓　

疫增强作用［Ｊ］．浙江农业学报，２０１６，２８（１１）：１　８２８—１　８３３．　

度的铁皮石斛组间进行比较，各组间均差异显著　

［５］　中国药典（Ｉ部）【ｓ］．北京：化学工业出版社，２０１０．　

（Ｐ＜０．０５），并在一定浓度范围内，随铁皮石斛浓度　

［６］朱科学，聂少平，李文娟，等．黑灵芝多糖对小鼠脾淋巴细胞增　

殖及诱生细胞因子的影响［Ｊ］．食品科学，２０１０，３１（１９）：　

的增高，细胞分裂增殖效果有增加趋势，铁皮石斛　

３５１—３５４．　

浓度为８０　ｇ／ｍＬ时对于正常小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞　

［７］　金丽琴，薛胜霞，吕建新，等．牛膝多糖衍生物对小鼠脾淋巴细　

分裂增殖显著（Ｐ＜０．０５）。对于小鼠脾脏Ｂ淋巴细　

胞增殖及诱生ＩＬ一２和ＴＮＦ一０【的影响［Ｊ］．中国生化药物杂　

胞而言，铁皮石斛浓度为４０　ｇ／ｍＬ时对免疫抑制　

志，２００８，２９（５）：３１２－３１４．　

小鼠脾脏Ｂ淋巴细胞增殖效果最佳。各浓度铁皮　

［８］　李焰，邓心慰，曾福炎，等．银杏叶复方对免疫抑制小鼠细胞因　

子和肝脾组织形态的影响［Ｊ］．中国畜牧杂志，２０１５，５１（１９）：　

石斛ＯＤ值均高于单纯ＬＰＳ刺激，且细胞增殖情况　

７１－７４．　

差异显著（Ｐ＜０．０５），但对照组中三个铁皮石斛浓　

［９］　郑乃珍，郑小香，李萍，等．猴头菇多糖对小鼠脾淋巴细胞体外增　

度差异不显著（Ｐ＞０．０５）。提示铁皮石斛协同ＬＰＳ　

殖及细胞周期的影响［Ｊ］．中国兽医科学，２０１５，４５（８）：８３７—８４２．　

促进正常小鼠脾脏Ｂ淋巴细胞增殖，参与机体体液　

［１Ｏ］赵洁，王曦鸣，李继祥．ＭＴＦ法检测淋巴细胞增殖能力的影　

免疫，但最佳浓度还有待进一步的研究。　

响因素［Ｊ］．畜禽业，２００８（２）：２８—３０．　

夏方等¨　Ｊ研究发现是由地锦草、白头翁和黄连　

［１　１］　Ｍｏｓｍａｎｎ　Ｔ．Ｒａｐｉｄ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｓｕｒ－　

ｖｉｖａｌ：Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｓｓａｙｓ［Ｊ］．Ｊ　

３味中药组方制成的地翁颗粒能促进小鼠脾脏Ｔ淋　

ＩＭＭＵＮＯＬ　ＭＥＴＨＯＤＳ，１９８３，６５（１）：５５－６３．　

巴细胞和Ｂ淋巴细胞增殖。宋美芳等＿１　研究结果表　

［１２］　胡庭俊，康乐，帅学宏，等．山豆根多糖对小鼠脾脏淋巴细胞　

明，铁皮石斛多糖在一定的浓度范围内能提高小鼠的　

体外增殖及分泌一氧化氮的影响［Ｊ］．中药药理与临床，　

免疫活性，促进脾脏淋巴细胞中细胞因子的分泌。以　

２００９，２５（５）：７０－７２．　

上学者的研究发现为本次试验结果提供有力的佐证。　

［１３］刘民，马华，李柏青．ＭＴＦ法检测小鼠淋巴细胞增殖性反应　

探讨［Ｊ］．中国实验动物学杂志，１９９９（３）：２Ｉ．２４．　

综上所述，在体外培养条件下，铁皮石斛协同　

［１４］　夏方，冷春青，付运星，等．中药地翁颗粒对小鼠脾淋巴细胞　

ＬＰＳ、ＣｏｎＡ促进脾脏淋巴细胞增殖，加强机体的免　

功能的影响［Ｊ］．中国兽医学报，２０１４，３４（８）：１　３４１—１　３４４．　

疫功能，为铁皮石斛的开发成畜禽免疫增强剂提供　

［１５］宋美芳，李光，陈曦，等．两种石斛多糖提高小鼠免疫活性的　

基础和理论依据。　

初步研究［Ｊ］．中国药学杂志，２０１３，４８（６）：４２８～４３１．　

尔　乖　乖　坏　乖　希　希　尔　尔　尔　筇　不　乔　舔　不　乖　不　．　不　

（上接第９９页）　

陈小龙，郑裕国，沈寅初．农用抗生素刺糖菌素的研究进展　

中易于抽取和推注，具有较好的实用优势和应用前景。　

［Ｊ］．农药，２００２，４１（１）：４—７．　

姚瑛，李涛，李敏．生物农药多杀菌素应用研究进展［Ｊ］．精细　

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