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2024年5月30日发(作者：)

双荧光素酶报告基因实验步骤

引言。

双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告基因实验是一种常用的分

子生物学实验方法，用于研究基因表达调控、信号转导通路等生物

学过程。该实验利用双荧光素酶系统，通过测定荧光素酶和荧光素

酶的活性，来研究目标基因的转录水平和调控机制。本文将介绍双

荧光素酶报告基因实验的步骤及相关注意事项，以供科研工作者参

考。

实验步骤。

1. 选取适当的载体。

在进行双荧光素酶报告基因实验之前，首先需要选择适当的表

达载体。常用的载体包括pGL3基因表达载体和pRL-TK基因表达载

体。pGL3基因表达载体含有火萤酶（Firefly luciferase）报告基

因，用于检测目标基因的转录水平；pRL-TK基因表达载体含有海洋

光明蛋白（Renilla luciferase）报告基因，用作内参对照。将目

标基因的启动子区域克隆至pGL3载体中，构建双荧光素酶报告基因

实验所需的表达载体。

2. 细胞培养和转染。

选取适当的细胞系进行实验，如HEK293、HeLa等常用的哺乳动

物细胞系。将细胞进行培养，待细胞生长至80%～90%的密度时，进

行转染。将构建好的双荧光素酶报告基因载体与转染试剂混合，加

入到细胞培养基中，进行细胞转染。根据实验需求，可以选择不同

的转染试剂和转染时间。

3. 荧光素酶检测。

待细胞转染后，根据实验设计的需要，进行不同处理，如给予

药物刺激、转染siRNA等。处理后，收集细胞，用相应的细胞裂解

液溶解细胞，离心收集上清液。分别取一部分上清液进行火萤酶和

海洋光明蛋白的活性检测。使用荧光素酶检测试剂盒，按照说明书

进行操作，测定两种荧光素酶的活性。

4. 数据分析。

将测得的荧光素酶活性数据进行比较和分析。通常情况下，将

火萤酶的活性作为目标基因的表达水平，而海洋光明蛋白的活性作

为内参对照。通过比较不同处理组和对照组的荧光素酶活性，可以

得出目标基因的表达水平及其受到的调控。

注意事项。

1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，避免细菌和真菌的污染。

2. 在进行细胞培养和转染时，要注意细胞的密度和转染试剂的

浓度，以免影响实验结果。

3. 在进行荧光素酶检测时，要根据试剂盒的说明书进行操作，

严格控制反应时间和温度，确保测得准确的荧光素酶活性数据。

4. 在数据分析时，要注意对照组的选择和实验重复次数，以确

保实验结果的可靠性和重复性。

结论。

双荧光素酶报告基因实验是一种常用的分子生物学实验方法，

通过测定火萤酶和海洋光明蛋白的活性，可以研究基因的转录水平

和调控机制。在进行实验时，需要严格遵守操作规范，注意实验细

节，以确保实验结果的准确性和可靠性。希望本文介绍的实验步骤

和注意事项能够对科研工作者进行双荧光素酶报告基因实验提供一

定的帮助。

本文标签： 实验荧光素酶进行转染基因

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