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2024-07-29 作者:

检验医学与临床2014年5月第11卷第10期Lab Med Clin,May 2014,Vo1.11,No.10 ・ 1353 ・ ・论 著・ 综合医院BD BACTECTMMGITTM 960仪快速分枝杆菌 培养与医院感染控制 徐 涛,陈玉莲,翁杏华,甄广怀,李锐邦,李景松(广东省台山市人民医院检验科 529200) 【摘要】 目的 证明使用全自动快速分枝杆菌培养仪(BD96o)能用于肺内、肺外临床标本(除血液、尿液)快速 培养分枝杆菌,除传染科外其他科室执行危急值报告制度确保医疗安全。方法 收集临床标本共596份,根据不同 的标本,进行标本预处理后,分别接种于BBL Prepared Culture Media分枝杆菌培养管,放入全自动快速分枝杆菌 培养仪(BD960)培养,并将标本同步进行抗酸染色及接种血平板。经培养,如仪器报警阳性,且培养物抗酸染色阳 性,将培养物用荧光聚合酶链反应(PCR)方法进行菌株鉴定,鉴定分为结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。 结果 596份I】盘床标本中,共培养出61株分枝杆菌,阳性率为10.2 (61/596),其中结核分枝杆菌占82.0%(50/ 61);非结核分枝杆菌占18.o (11/61)。全自动快速分枝杆菌培养仪(BD960)阳性标本检出时间较快,阳性标本最 早4 d,平均检出时间为10 d。结论 综合医院使用全自动快速分枝杆菌培养仪(BD960)能快速培养分枝杆茵,做 到早诊断、早隔离、早治疗,控制结核病传染,控制综合医院医院感染,确保医疗安全。 【关键词】结核; 全自动快速分枝杆菌培养仪; 结核分枝杆菌; 非结核分枝杆菌; 医院感染 DOI:10.3969/j.issn.1672—9455.2014.10.022 文献标志码:A 文章编号:1672—9455(2O14)10—1353一O3 Application of BD BACTEC MGIT 960 for fast culture of mycobacterium in general hospital and hospital infection control XUTao,CHENYu—lian,WENG Xing—hua,ZHENGuang—huai,LJRui—bang,LJ Jing—song(Department of Clinical Laboratory,Taishan People's Hospital,Taishan,Guangdong 529200,China) [Abstract]Objective To explore the application of fast mycobacterial culture instrument(BD960)for the fast culture of mycobacterial from intra—pulmonary or extra-pulmonary specimens.Methods A total of 596 cases of clini— cal specimens were collected,pretreated,inoculated in BBL Prepared Culture Media mycobacterium culture tube, then cultured in BD960 instrument.All specimens were synchronous1y detected for acid—fast staining and inoculation of blood plate.Mycobacterium tuberculosis or non—Mycobacterium tuberculosis in culture was identified by using flu— orescence polymerase chain reaction(PCR),if instrument warned for positive alarm and the culture was positive for acid—fast stain.Results In 596 clinical specimens,61 strains of mycobacteria were obtained,and the positive rate was 10.1 (61/596),including Mycobacterium tuberculosis for 82 (5o/61)and non—Mycobacterium tuberculosis for 18.0 (11/61).Positive specimens could for the fast be detected within 4 days by culturing of BD960,and the aver— age time need for detection for positive specimens was 10 days.Conclusion Application of BD960 instrument in gen— eral hospital could be helpful for the fast culture of mycobacterium,for early diagnosis,isolation and treatment of pa— tients,also for the contro1 of tuberculosis infection and nosocomial infections. [Key words]tuberculosis; automatic fast mycobacteria culture system; Mycobacterium tuberculosis; mon—Mycobacterium tuberculosis: nosocomial infection 对肺结核病患者及时、准确的诊断和彻底治愈是消除传染 菌感染患者的各类临床标本596份,其中肺部标本467份(痰 源、控制结核病流行的最重要措施l_ 】。传染性肺结核传染性最强 液387份、支气管冲洗液8O份)、肺外标本129份(胸腔积液89 的时间是在发现及治疗之前。美国疾病控制和预防中心(CDC)建 份、腹水2o份、心包积液4份、伤口分泌液5份、脓液6份、粪 议必须尽一切努力使各个实验室在诊断分枝杆菌时尽可能使用最 便3份、关节液2份)。 快速的方法。在CDC推荐的方法中包括使用液体或固体培养基 1.2 仪器与试剂 美国BD公司BD BAcTEc MGIT ” 培养分枝杆菌。全自动快速分枝杆菌培养仪(BD960)是以液体培 960全自动分枝杆菌培养仪;广州达安公司DA7600型核酸扩 养为基础的新一代荧光检测系统,能快速培养分枝杆菌,做到早诊 增仪;美国BD公司BD BBI Prepared Culture Media(分枝 断、早隔离、早治疗口],提高了对分枝杆菌的诊断水平,控制综合医 杆菌培养管)、N一乙酰一 半胱氨酸+2 NaOH(NaCI+2 院感染,保护易感人群,确保医疗安全。 NaOH消化液)、BACTEC MGIT 960 Growth Supplement 1资料与方法 (生长添加剂)、BACTEC MGIT960 PANTA(杂菌抑制 1.1一般资料收集2012年4月至2013年9月疑似分枝杆 剂)、pH一6.8的无菌磷酸盐缓冲液(PBS);广州达安公司结核 作者简介:徐涛,男,专科,主管技师,主要从事临床微生物研究工作。 ・ 1354 ・ 检验医学与临床2014年5月第lI卷第10期 I ab Med Clin,May 20l4,Vo1.11,No.10 分枝杆菌核酸扩增(聚合酶链反应)荧光检测试剂盒;广州迪景 生物有限公司的 平板、麦康凯平板、沙氏平板、真菌显色平 板;广东珠海 索生物试剂有限公司抗酸染色液。 率污染率为5.2 (31/596)。符种临 标小・lI痰液标本 染牢最高,主要是杆 和真菌污染。见表2。 表2 不同类型临床标本培养分枝杆菌的污染率 1.3标本预处理痰液、支气管冲洗液、伤口分泌液、脓液、粪 便标本中加入等量的NaC1+2 NaOH消化液,在旋涡搅拌器 卜振荡混匀,处理1 5~20 min后,加入pH一6.8的尤菌PBS 中和,离心去¨L清液,沉淀加l~3 ml pH一6.8的无菌PBS制 成悬浊液,振荡混匀备用。体液标本3 000×g离心15 min,取 沉淀进行消化处理。 1.4培养方法标本接种前,在MGIT培养管中先加入0.8 6 ;2 8 10 O. O {4 50.O mI MGIT PANTA/Growth Supplement(杂菌抑制剂/生长添 加剂),再加入0.5 mI 处理后悬浊液,同时接种血平板(检测 是否污染)、直接涂片抗酸染色(以便阳性快速报告),将培养管 放入BD BACTEC MGIT 960仪。培养法严格按照BD BACTE MGI F 960系统操作说明书进行,培养时间设定 为42 d。仪器提示阳性结果,取培养液涂片用快速抗酸染色法 进行确认。抗酸染色阳性的菌株用荧光PCR技术鉴定是结核 分枝杆菌还足非结核分枝杆菌,操作严格按照试剂盒说明书进 行。仪器提示阳性结果,涂片抗酸染乜镜检未找到抗酸杆菌, 将此分枝杆 培养的标本接种在血平板、麦康凯平板、沙氏平 板、真菌 色平板,经37 C培养,有革兰阴性杆菌或真菌 长, 此情况为标本污染判为假m性。 l|5所有接种和其他处理步骤都应在生物安全柜中进行,使 用生物安全水平为Ⅱ级的接种方法、防护措施和没备。所有接 种过的培养管等必须先经过高压灭菌后再按医疗垃圾处删。 2结 果 2.1 培养分枝杆菌阳性率 596份临床标本培养出61株分 枝杆菌,阳性率为1O.2 。 2.2不同类型临床标本培养出的分枝杆菌,见表1。 表1 不同类型临床标本培养出的分枝杆菌的 检出情况[”( )] 标本 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 合计 痰 31(62.0) 387(64.9) 支气管冲洗液 12(24.0) 8o(13.5) 胸腔积液 3(6.0) 89(14.9) 腹水 1(2.0) 20(3.4) 心包积液 0(0.0) 4(0.7) 伤口分泌液 0(0.0) 5(0.8) 脓液 1(2.0) 6(1.0) 粪便 1(2.0) 3(0.5) 关节液 l(2.0) 2(0.3) 合计 50(82.0) 596(10o.0) 2.3全自动快速分枝杆菌培养仪(BD960)分枝杆菌培养时间 培养阳性平均时间为10 d(4~29 d)。BD BACTEC MG— IT 960仪第1周阳性率为29.5 ,第2周累积阳性率为 85.3 ,第3周积阳性率为95.】 ,第4周累积阳性率为 96.4 ,第5周累积阳性率为99.1 。 2.4 BD BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养污染 . . 5 2 i) } 3讨 论 本院分枝杆菌培养标本 性率为10.2 ( 包括已确诊 为结核的患者)比专科医院低,结核病【 82.0 ,非结核病^ 18.0 ,综合医院更要 视呼吸道传染的肺结核,隔离肺 核 患者,加强空气淌毒n 】。BD F,ACTEC MGIT 960个fI动 分枝杆菌培养仪检f“ 悱标小lJl『川为4~29 d, 均10 d, 陶 外学者报道的9.6~14.4 d卡IJ , 培养的川时^接涂片抗 酸染色满足检验结果的时效 。BI)l{AC FEC M( 960 全[{动分枝杆菌培养污染牢为5.2 与文献[7]报道的接近, 提示要缩短标本采集和 处理的 隔时I1iJ=, 揲作IIl婴 意避 免污染。 约行20 的活动肺结核忠 尢 状或仪 ‘轻微症状,这 部分患者往什就在综合医院就医I酊 足 防所、胸科医院。 多数综合医院末做分枝杆菌培养,这部分患 是隐藏 综合医 院里 要的结核病传染源,这些患栉 j其他患 一房 间以非结核病的方式进行治疗。由于 足结核病专科医院,医 生首先想到的也 是结核病,早期结核病患者的影像学改变小 明显, 单只照胸片也会造成漏枪, 影像学刈 结核病的诊断 缺乏特异性。当同宅中 活动肺结核患 ,其咳嗽、打喷嚏、大 声说活时,把大量含有结核菌的微小痰沫排放至 气 ,,f 密 闭的空调环境中,结核杆菌飘浮空气的时川会 k,同审的患 者抵抗力低下,吸入含有结核杆菌的痰沫,在这种情况下传染 的速度更快,更容易受到传染,造成仄院内感染。 随着医疗技术进步,人LJ老龄化、免疫力低卜,条件敛病菌 增多,如主要发生于手术污染、介入治疗污染、捕钎污染、人 透析污染及心脏体外循环污染等情况下, 结核分枝杆菌引起 医院感染,非结核分枝杆菌引起的感染治疗 结核病 同,会 造成结核杆菌耐药的假象 。要想发现凡区别这 传染源致 病菌就要依靠综合医院分枝杆菌培养、鉴定及荧光PCR等技 术。综合医院在传染性诊断及答别中起到r侦察兵的作用,及 时发现传染致病菌,保护易感人群。 完整的医院感染控制应 临床医 、院感办、临床微生 物室等多部门的芪同协作,才能把医院感染控制刮最低。奉院 对抗酸杆菌涂片、BD BACTEC…MGIT 960 n动分枝杆 菌培养阳性结果实行即时电话报告,及时将患 转入感染科, 进行隔离,规范治疗。结核患 住过的 迎病房采取 格的消 毒措施,切断传播途径、保护易感人群,防止医院感染。 检验医学与临床2O14年5月第11卷第10期 I ab Med Clin,May 2014,Vo1.11,No.10 - l355 ・ BD BACTEC ”MGH 960全自动分枝杆菌培养仪弥补 /93. _r直接涂片检测抗酸杆菌敏感性较低,不能区分是活菌还是死 菌。临床上对结核病和非结核分枝杆菌肺病很难作出鉴别诊 断,因为这两种疾病在发病、临床辰现、影像学、涂片和培养、结 高嫦娥.环境危险因素与肺结核发病的相关性分析[J]. 社区医学杂志,2009,7(16):73—74. 张爱华,卢晓强,张风云.采取科学有效的管理提升医院 感染管理质鼍[J].中华医院感染学杂志,2013,23(18): 4474—4475. 核菌素试验、病理学检查等方面均十分相似,故只能从标本中 分离出分枝杆菌作鉴定才能确诊 。各种检验方法是相互补 充, 不足相互排斥的,与荧光PCR的联合应用解决了只培养 而不能区分是结核分枝杆菌还是fE结核分枝杆菌,避免了漏检 和误检。 综上所述,BD BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌 Rishi S,Sinha P,Malhotra B,et a1.A comparative study for the detection of Mycobacteria by BACTEC MGIT 9 6O,Lowenstein Jensen media and direct AFB smear ex— amination[J].Indian J Med Microbiol,2007,25(4):383— 386. 培养仪联合应用直接涂片快速抗酸染色、荧光PCR技术,能用 于肺内外临床标本快速的分枝杆菌培养、鉴定,综合医院应重 视结核病的诊断,控制医院感染,确保医疗安全。 参考文献 陈晓,杨青,徐根云,等.Bactec MGIT 960系统与改良罗 氏培养基法用于培养分枝杆菌的比较[J].临床检验杂 志,2011,29(5):396-397. 沙巍,唐神结,肖和平,等.人类宿主易感基因多态性与结 核病和耐药结核病发生的相关性研究进展fJ].中华结核 和呼吸杂志,2010,33(7):534—536. 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[9]李志勇,孙建宁,张硕峰,等.近1O年乌头碱类中药中毒 议,法医鉴定有助于明确死因,减少不必要的医疗纠纷;另一方 面,对于医疗机构及医师,法医检验结果除了明确死因外,更有 助于医师提高对于不典型、非特异病例的认识及重视,为以后 有效地判断及预防提供帮助,提高诊疗水平。 参考文献 临床文献分析[J].中国中医药信息杂志,2008,15(3): 1OO一1O2. [1O2于智敏,吕爱平,吴萍,等.对中药安全性评价研究的思考 [J].中国中医基础医学杂志,2003,9(5):66—68. [1]Chan TY,Critchley J A.Usage and adverse effects of Chi— nese herbal medicines[J].Hum Exp Toxicol,1996,15 (1):5-12. [11]Chan TY.Aconite poisoning[J].Clin Toxicol(Phila), 2009,47(4):279—285. [12]刘伟,沈敏,秦志强.乌头急性中毒死亡者乌头生物碱的 体内分布[J].法医学杂志,2009,25(3):176—178. [2]陈龙,黄光照.14例非法行医所致药物中毒死亡案例分析 [J].法医学杂志,1997,13(4):215-217. [3]原思通.对“中药中毒病例攀升”问题的思考[J].中国中 药杂志,2000,25(10):3-6. (收稿15期:2013-10 21 修回日期:2013 12—25) 

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