复方藤梨根制剂对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤NF-κB p65表达的影响_百度文

2024-07-29 作者:

2012年10月第9卷第29期

·论著·

复方藤梨根制剂

对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤ＮＦ－κＢｐ６５表达的影响

何好臣1方勇2郭勇3徐玲4吕俊海5

1.中国中医科学院西苑医院，北京100091；2.浙江大学医学院附属邵逸夫医院，浙江杭州310016；3.浙江省中医院，浙江杭州310053；4.杭州市红十字会医院，浙江杭州310003；5.中国中医科学院医学实验中心，北京100700

[摘要]目的研究复方藤梨根制剂（FFTLG）对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制效应及其与瘤组织核转录因子（NF-κBp65）表达的关系。方法建立人胃癌裸鼠腹腔移植模型。24只裸鼠随机分为4组：FFTLG高、中、低剂量组和生理盐水组，分别观察荷瘤裸鼠腹腔移植瘤的生长情况，检测NF-κBp65的表达。结果生理盐水组、FFTLG低、中、高剂量组的抑瘤率分别为0、7.8%、30.0%和33.3%，FFTLG各组与生理盐水组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；腹腔瘤组织中NF-κBp65阳性表达细胞百分比分别为（39.67±19.82）%、（33.00±19.94）%、（29.20±17.68）%、（27.17±15.75）%。FFTLG组的中、高剂量组与生理盐水组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论FFTLG对裸鼠腹腔移植瘤生长具有抑制作用，且随着剂量的增加其作用增强，其作用途径之一可能是通过下调NF-κBp65的

表达。

[关键词]复方藤梨根制剂；胃肿瘤；移植瘤；裸鼠；核转录因子[中图分类号]R735.2[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2012）10（b）-0013-03

InfluenceofFuFangTengliGenMixtureonexpressionofNF-κBp65inhu-mangastriccancertransplantedinabdominalcavityofnudemice

HEHaochen1FANGYong2GUOYong3XULing4LUJunhai5

HospitalofChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100091,China;RunShawHospitalAffiliatedtoSchoolofMedicineofZhejiangUniversity,ZhejiangProvince,Hangzhou310016,China;alofTra-ditionalChineseMedicineinZhejiangProvince,Hangzhou310053,China;ouRedCrossHospital,ZhejiangProvince,Hangzhou310003,China;lExperimentalCenterofChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China

[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectsofFufangTengliGenMixtureinhibitinghumangastriccancerimplantedinabdominalcavitiesofnudemiceandtherelationbetweenanti-cancereffectsofFufangTengliGenMixtureandtheexpres-sionofNF-κsModelsofnudemicewithhumangastriccancertransplantedintheirabdominalcavitieswereestablished.24nudemicewererandomlydividedinto4groups:groupsbyhigh,moderate,lowthicknessFFTLGmix-tureandgroupbyNS,thegrowthoftumoursintheirabdominalcavitieswereobserved,theexpressionsofNF-κBp65ingastriccancertissueweredetectedbyimmunohistochemistry,sThetumourinhibitionratesofNS,low,moderate,highthicknessFFTLGmixturegroupswere0,7.8%,30.0%and33.3%,edtocontrolgroup,experimentgroupsallshowedsignificantdifferences(P＜0.05orP＜0.01);expres-sionratesofNF-κBp65were(39.67±19.82)%,(33.00±19.94)%,(29.20±17.68)%,(27.17±15.75)%,-paredtocontrolgroup,moderate,highthicknessFFTLGmixturegroupsallshowedsignificantdifferences(P＜0.05).Con-clusionFFTLGMixturecaninhibitthegrowthoftumourstransplantedinabdominalcavitiesofnudemice,themoredosage,thebettereffect,itsmechanismmaypartlybetolowertheexpressionofNF-κBp65.

[Keywords]FufangTengligenMixture;Gastriccarcinoma;Transplantedtumor;Nudemice;NF-κBp65

胃癌目前仍是严重危害人类健康的恶性肿瘤，在世界范围内居各种恶性肿瘤发病的第4位，死因第2位。我国胃癌目前每年死亡约36万人，占各类恶性肿瘤死因的第2位[1]。即使获得根治性手术切除的患者，5年生存率仅为30%，绝大多数患者死于胃癌的复发和转移[2]。因此，对胃癌浸润和转

[基金项目]浙江省中医药青年基金项目（项目编号：A2005Y012）。

[作者简介]何好臣（1973-），男，河北临漳人，汉族，硕士研究生，主治医师；研究方向：中西医结合临床肿瘤防治研究。

[通讯作者]郭勇（1961-），男，汉族，硕士研究生，主任医师；研究方向：中西医结合临床肿瘤综合治疗。

移的研究已成为当前的主要任务之一。但是对于肿瘤转移的防治方面，尚无可靠的方法应用于临床。探索中医药在这一领域作用和优势越来越受到广泛的重视。本实验研究复方藤梨根制剂对裸鼠腹腔移植瘤的抑制作用及其与NF-κBp65表达的关系，以期为临床治疗提供依据。1材料与方法1.1材料

1.1.1实验动物

BALB/c-nu/nu裸鼠24只，鼠龄（51.5±0.5）周，体重21.5～25.5g，全部雄性。

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·论

著·

1.1.2细胞株

经裸鼠皮下传代至第8代的人胃癌SGC-7901细胞株。以上两者由浙江中医药大学实验动物中心提供。1.1.3实验用药

复方藤梨根制剂（FFTLG）：由藤梨根、虎杖根、水杨梅根、白术、党参、茯苓、薏苡仁等组成。由浙江省中医院提供。上述药材按比例加水煎煮，并浓缩至0.5、1.0、2.0g/mL，分装于消毒后的玻璃瓶中，储存于4℃冰箱内备用。裸鼠中药给药剂量按药理学实验动物给药方法马氏定理计算，以成人剂量/体重30.0、15.0、7.5倍灌胃给药。1.1.4主要试剂

NF-κBp65鼠抗人免疫组化染色试剂盒（二步法）、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。RMPI-1640细胞培养液由浙江大学实验动物中心惠赠。1.2方法

1.2.1人胃癌裸鼠腹腔种植模型的建立

取第8代裸鼠皮下移植瘤，切成小块，与细胞培养液混合，无菌条件下研磨，制成细胞悬液，过200目尼龙丝网，镜下调整浓度至约1×107/mL，抽取细胞悬液注入裸鼠腹腔（0.2mL/只）。入选裸鼠24只，将其笼于无特定病原的条件下饲养。1.2.2实验分组及给药

将造模后裸鼠随机分为4组，6只/组。接种后18d开始

给药，所有裸鼠按照组别不同每天灌服相同体积生理盐水、低、中或高浓度复方藤梨根制剂0.6mL，连续21d后停止给药。

1.2.3观察指标

1.2.3.1裸鼠肠系膜种植瘤瘤量末次灌药后50d应用引颈脱臼法处死裸鼠并解剖腹腔，自根部将肠系膜连同上面的移植瘤一起剪下称重。

1.2.3.2抑瘤率抑瘤率（%）=（对照组瘤重-用药组瘤重）/对照组瘤重×100%。

1.2.3.3免疫组化法测定NF-κBp65基因的表达将移植瘤常规石蜡包埋，切片，SP法免疫组化染色，采用免疫组化二步法。阳性细胞计数：镜下观察，以细胞核或细胞浆中出现清晰棕黄色颗粒为阳性反应。每张切片选5个高倍视野，计算阳性细胞数占同类细胞的百分比并记录。1.3统计学方法

采用SPSS11.5统计软件包进行统计。计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2结果

2.1实验情况

所有入组裸鼠造模成功，腹腔接种胃癌细胞后均有肿瘤生长，接种后13d可触摸到裸鼠腹腔内出现肿瘤结节，大小不等，进行性增大；19d始可观察到裸鼠腹围增大。实验过程中，肿瘤持续生长，裸鼠腹围持续增大，生理盐水组增长最快，未出现不生长或肿瘤自发消退现象。

解剖裸鼠肉眼可观察到大多数裸鼠腹腔内有血性腹水生成，量多少不等，横膈、腹膜、肠系膜、肝周、网膜、盆腔等多处见肿瘤结节、肿块，呈灰白色，质地偏硬，与周围组织粘连，部分有坏死，直径从0.1～3.0cm大小不等。提示移植瘤未被

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排斥，肿瘤移植成功。见图1、2。

图1腹腔移植瘤及血性腹水

图2肠系膜移植瘤

2.2抑瘤作用

移植瘤重量方面，各组比较结果相同：FFTLG中、高剂量组与生理盐水组比较、FFTLG高剂量组与低剂量组比较，差异均有高度统计学意义（P＜0.01）；中剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；FFTLG高剂量组与中剂量组比较、低剂量组与生理盐水组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。NF-κBp65表达量方面，FFTLG高、中剂量组与生理盐水组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；FFTLG低剂量组与生理盐水组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；FFTLG高、中、低剂量组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。NF-κBp65表达结果显示，所有切片镜下均可见细胞浆或细胞核有棕黄色颗粒，多少不等。见图3、4。

表1各组裸鼠腹腔种植瘤个数、重量及NF-κBp65的表达

组别裸鼠个数

移植瘤重量抑瘤率NF-κBp65（x±s，g）

（%）

（x±s，%）

生理盐水组

639.67±19.82039.67±19.82FFTLG低剂量组64.12±0.447.833.00±19.94FFTLG中剂量组63.13±0.85

★▲

30.029.20±17.68◆FFTLG高剂量组

6

2.98±0.84★●

33.3

27.17±15.75◆

注：与生理盐水组比较，★P<0.01，◆P<0.05；与FFTLG低剂量组比较，

●

P<0.01，▲P<0.05

3讨论

恶性肿瘤尤其是晚期恶性肿瘤患者以虚实夹杂、正虚邪实居多，故中医肿瘤治疗大法一般在扶正基础上兼顾攻邪。笔者在本实验中所用的复方藤梨根制剂由浙江省中医院肿瘤科于20世纪70年代形成的“三根糖浆”发展而来，是浙江

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图3免疫组化生理盐水组NF-κB表达（SP法，×400）

比较无统计学意义（P>0.05），提示FFTLG制剂可抑制胃癌腹腔种植瘤生长，呈剂量相关性。

NF-κB是一种转录因子，对肿瘤的发生、发展过程起重要作用，NF-κBp65是NF-κB的活化成分。近些年，以Van[6]和Karin[7]为代表的很多研究证实了NF-κB所调控的基因在癌细胞增殖、浸润、新生血管形成、耐药、转移等多个方面都起到了重要的作用。在胃癌细胞和组织中表达激活与胃癌的形成、发展、浸润转移密切相关，并在某种程度上决定着患者的预后[8-9]。

就腹腔瘤组织NF-κBp65的表达而言，本次实验中FFTLG高、中剂量组与生理盐水组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；FFTLG低剂量组与生理盐水组比较，FFTLG高、中、低剂量组之间比较均无统计学意义（P＞0.05）。分析认为，FFTLG制剂可抑制荷瘤裸鼠肿瘤组织NF-κBp65的表达，且随剂量增大而作用增强，FFTLG高、中剂量组效果显著。提示FFTLG制剂可降低胃癌裸鼠腹腔种植瘤组织NF-κBp65的表达且呈剂量相关，其抑制SGC-7901人胃癌细胞腹腔转移的途径之一可能是通过下调NF-κBp65的表达。

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（收稿日期：2012-05-22本文编辑：卫轲）

图4免疫组化组高剂量组NF-κB表达（SP法，×400）

省中医院肿瘤科临床治疗消化道恶性肿瘤的常用方，由藤梨根、虎杖根、水杨梅根、党参、茯苓、白术、薏苡仁等组成，其中藤梨根、虎杖根、水杨梅根具有清热解毒作用，虎杖根、水杨梅根兼具活血化瘀作用，党参、茯苓、白术具有补气健脾作用，薏苡仁具有健脾、利水渗湿作用。诸药合用，共奏清热解毒、活血化瘀、补气健脾等功效。从药理成分分析，藤梨根含有猕猴桃碱、熊果酸等，虎杖根含有白藜芦醇等成分，水杨梅根含有水杨梅甲素及生物碱等化合物，均为有效的抗癌成分；薏苡仁的主要成分为薏苡仁油、薏苡仁酯、甾醇、氨基酸等，对癌细胞有抑制作用。益气健脾药党参、白术、茯苓有增强宿主免疫功能的作用[3-5]，可全面调节身体内环境的平衡，重建机体抗癌能力。

本实验中测定移植瘤瘤重及抑瘤率结果显示，FFTLG高剂量组瘤重最小，抑瘤率最高，FFTLG中、低剂量组效果相对较差，生理盐水组瘤重最大，FFTLG低剂量组与生理盐水组

（上接第12页）

综上所述，巴戟天醇提物能够减轻心肌IRI后心肌细胞凋亡，这可能与其能够降低心肌组织中的IL-1β、TNF-α表达有关，巴戟天醇提物可能通过这一途径发挥保护IRI心肌的作用。

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（收稿日期：2012-05-24本文编辑：程铭）

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