胡桃醌对人结肠癌HCT-8细胞黏附及基质金属蛋白酶活性的影响

2024-07-29 作者:

第３８卷　第１期２０１２年１月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版）

）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ　　　　ｙ（

Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．１　

Ｊａｎ．２０１２

８９

）文章编号］６７１５８７２０１２０１００８９０４　　［　１－Ⅹ（－－胡桃醌对人结肠癌ＨＣＴ８细胞黏附及基质金属蛋白酶活性的影响－卢　阳，李　薇，崔久嵬，徐效义，王冠军（）吉林大学第一医院肿瘤中心，吉林长春１３００２１

［）活性及表摘　要］　目的：观察胡桃醌对人结肠癌ＨＣＴ８细胞黏附作用、基质金属蛋白酶（ＭＭＰ２、ＭＭＰ９－达的影响，阐明其抑制肿瘤侵袭转移的可能作用机制。方法：取体外培养处于对数生长期人结肠癌ＨＣＴ８细－·Ｌ－１组，并设空白对照组，处理７胞，分为胡桃醌１．２５、２．５０、５．００、１０．００和２０．００ｍ２ｈ后通过细胞黏附ｇ实验观察ＨＣＴ８细胞黏附率的变化，明胶酶谱法检测ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ－　ｇ法检测细胞

－１

ＭＭＰ２和ＭＭＰ９蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较，１．２５、２．５０、５．００、１０．００和２０．００ｍｇ·Ｌ胡桃

）；２·Ｌ－１胡桃醌组ＭＭＰ醌组ＨＣＴ８细胞黏附率逐渐降低（Ｐ＜０．０５．５０、５．００、１０．００和２０．００ｍ２活性降低－ｇ（），各浓度胡桃醌处理组ＭＭＰ）；各浓度胡桃醌处理组ＭＭＰＰ＜０．０５９活性均降低（Ｐ＜０．０５２、ＭＭＰ９蛋白表）。结论：胡桃醌明显抑制ＨＣ达水平均降低（Ｐ＜０．０１Ｔ８细胞黏附，降低ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性及蛋白表达水－平，提示ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性及蛋白表达水平下降可能是胡桃醌在体外抑制ＨＣＴ８细胞黏附的作用机制。－［关键词］　胡桃醌；细胞黏附；基质金属蛋白酶；结肠肿瘤［中图分类号］　Ｒ文献标志码］　Ａ７３５．４　　［

ｕｌｏｎｅＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｏｎａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｍａｔｒｉｘ　　　　　　　　ｊｇ

ｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８ｃｅｌｌｓｍｅｔａｌｌｏｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　　　　　－ｐ

，Ｌ，Ｃ，ＸＵ　，ＷＡＮＧｉｕｎＬＵ　ＹａｎＩＷｅｉＵＩＪｉｕｅｉＸｉａｏＧｕａｎ　　－ｗ－　－ｙｊｇ（，Ｆ，Ｊ，Ｃ）ＴｕｍｏｒＣｅｎｔｅｒｉｒｓｔＨｏｓｉｔａｌｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｈａｎｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ　　　　ｐｙｇ

：Ｏ，ａｕｌｏｎＡｂｓｔｒａｃｔｂｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｏｎａｄｈｅｓｉｏｎｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｍａｔｒｉｘ　　　　　　　　　　　ｊｇｇｐｊ），ａｍｅｔａｌｌｏｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８ｃｅｌｌｓｎｄｃｌａｒｉｆｔｈｅｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ　　　　　－　　　ｐｙｐ　ｔｈａｔｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｉｎｖａｔｉｏｎａｎｄｍｉｒａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ８ｃｅｌｌｓｕｌｏｎｅ　　　　　　　　　　　　　－ｇｊｇ

－１

ｒｏｗｔｈｈａｓｅｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏａｔｌｏａｒｉｔｈｍｉｃｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ１．２５，２．５０，５．００，１０．００ａｎｄ２０．００ｍ　　　　　　　　　　　ｇｐｇｇ·Ｌ

，ｗｕｌｏｎｅｒｏｕｓｈｉｌｅｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕｗａｓｓｅｔｕｈｅａｂｉｌｉｔｏｆｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ　　　　　　　　　　　　ｊｇｇｐｇｐｐ．Ｔｙｙ　　　ａｓｓａａｆｔｅｒｔｒｅａｔｅｄｆｏｒ７２ｈ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｅｌａｔｉｎａｄｈｅｓｉｏｎ　　　　　　　　　　　　　ｙｙｇ　　，ａｎａｌｓｉｓｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｍｅｔｈｏｄ．ｚｍｏｒａｈ　　　　　　　　ｙｇｐｙｙｐｙ　ｇ　　，ｔ，２Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＣｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕｈｅａｄｈｅｓｉｏｎｒａｔｅｓｏｆＨＣＴ８ｉｎ１．２５．５０，５．００，１０．００ａｎｄ　　　　　　　－　ｐｇｐ

·Ｌ－１；ｔ２０．００ｍｕｌｏｎｅｒｏｕｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）ｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＭＭＰ２ｉｎ２．５０，５．００，１０．００ａｎｄ　　　　　　　ｇｊｇｇｐ－１

；ｔ２０．００ｍｕｌｏｎｅｒｏｕｓｕｌｏｎｅｒｏｕｓｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＭＭＰ９ｉｎａｌｌｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　　　　　　　　　　　ｇ·Ｌ　ｊｇｇｐｊｇｇｐ

；ｔｕｌｏｎｅｒｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）ｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｗｉｔｈ　　　　　　　　　　ｊｇｇｐｐｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｊｕｌｏｎｅｃｏｕｌｄｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅａｄｈｅｓｉｏｎ　　　　　　　ｇｇｙ　ｒｏｔｅｉｎａｂｉｌｉｔｏｆＨＣＴ８ｃｅｌｌｓａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９．Ｉｔｉｓｓｕｅｓｔｅｄｔｈａｔ　－　　　　　　　　　　　　　ｐｙｐｇｇ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｒｏｔｅｉｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｍｉｈｔｂｅｔｈｅｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｈａｔｔｈｅ　　　　　　　　　　　　　　ｇｐｐｇｐ　ｕｌｏｎｅｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅａｄｈｅｓｉｏｎｏｆＨＣＴ８ｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．　　　　　　－　　ｊｇ

：；ｃ；ｍ；ｃＫｅｗｏｒｄｓｕｌｏｎｅｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｒｏｔｅｉｎａｓｅｓｏｌｏｎｎｅｏｌａｓｍｓ　　　ｊｇｐｐｙ　［收稿日期］　２０１１１０１０－－［）基金项目］　吉林省中医药管理局中医药科技项目资助课题（ｔ０５６２０１０－ｐ

［，女，辽宁省沈阳市人，在读医学硕士，主要从事肿瘤的基础与临床研究。作者简介］　卢　阳（１９８５－）［：０，Ｅ－ｍ：ｇ通信作者］　王冠军（Ｔｅｌ４３１８８７８２１０２ａｉｌｕａｎｕｎｗａｎ２００６＠１６３．ｃｏｍ）－ｊｇ

９０

吉林大学学报（医学版）　第３８卷　第１期　２０１２年１月

）化学名为５ｕｌｏｎｅ１，４　　胡桃醌（－羟基－－萘ｊｇ

醌，属于萘醌类化合物，存在于胡桃属植物中，如

］１２－。中国民间广为流核桃树叶、树皮、青果皮等［

清培养基制成单细胞悬液，调节细胞浓度为３×

５　－１

１０Ｌ，以每孔２００μＬ加入包被的培养板中，置

。取出９３７℃、５％ＣＯ６孔板，２培养箱中孵育２ｈ

传饮用核桃树皮水煎剂治疗恶性肿瘤的验方，现已开展大量实验对胡桃属植物成分进行分离鉴定，国内外研究证明胡桃醌对血液系统及实体肿瘤细胞具

］３５－。目前对胡桃醌抗肿瘤作用有抑制增殖的作用［

轻轻洗去未黏附的细胞，用１０％中性甲醛１００μＬ

固定，３０ｍｉｎ后洗去。每孔加０．５％结晶紫１００μＬ，室温染色２ｈ，蒸馏水洗涤１次，阴干后每孔加入２％ＳＤＳ溶液１００μＬ，于酶标仪５７０ｎｍ波长测定各孔吸光度（处Ａ）值。细胞黏附率＝（的研究多为观察细胞凋亡的影响，关于其对肿瘤侵袭作用影响的报道较少见。黏附能力改变为肿瘤细胞发生侵袭、转移的始动步骤，本实验主要以基质金属蛋白酶２（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐ

ｒｏｔｅｉｎａｓｅ－２，ＭＭＰ２）和基质金属蛋白酶９（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐ

ｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９，ＭＭＰ９）为观察指标，探讨胡桃醌对人结肠癌ＨＣＴ－８侵袭、转移作用的影响。

　材料与方法

．１　细胞、药物及主要试剂　人结肠癌ＨＣＴ－８细胞株为本实验室保存株，属贴壁生长型细胞。胡桃醌购自Ｓｉｇｍａ公司，质量分数９８％。纤维黏连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ，Ｆｎ）为美国Ｓｉｇｍａ公司产品；鼠抗人ＭＭＰ－２单克隆抗体、兔抗人ＭＭＰ－９多克隆抗体购自Ａｂｃａｍ公司；鼠抗人ＧＡＰＤＨ抗体购自ＰｒｏＭａｂ公司；ＨＲＰ标记的羊抗兔ＩｇＧ购自北京中杉金桥公司；ＨＲＰ标记的羊抗鼠ＩｇＧ购自美国Ｚｙ

ｍｅｄ公司；ＲＰＭＩ　１６４０为Ｇｉｂｃｏ公司产品；胎牛血清为杭州四季青公司产品；甲叉双丙烯酰胺为美国Ｓｉｇｍａ公司产品；丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠购自北京鼎国公司。

．２　主要仪器　生物安全柜（

上海力申科学仪器有限公司）；二氧化碳培养箱（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）；酶标仪（ｍｏｄｅｌ　

５５０）、电泳仪（ＢＩＯ－ＲＡＤ公司）；倒置显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；洗片机（美国Ｋｏｄａｋ公司）

。．３　细胞培养　人结肠癌ＨＣＴ－８细胞培养在含０％胎牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液中，置于５％Ｏ２、

３７℃培养箱内，０．２５％胰蛋白酶消化传代，每２～３ｄ传代１次。

．４　细胞黏附实验　将ＦＮ用ＰＢＳ液稀释成

００ｍｇ·Ｌ－１，以每孔１００μＬ分别包被９６孔板，每组包被３复孔。３７℃包被２ｈ，用ＰＢＳ洗涤２次，％ＢＳＡ封闭２ｈ。收集胡桃醌终浓度分别为

．００、１．２５、２．５０、５．００、１０．００和０．００ｍｇ

·Ｌ－１处理７２ｈ的ＨＣＴ－８细胞，以无血理组平均Ａ值／对照组平均Ａ值）×１００％。．５　明胶酶谱法检测ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性　取对数生长期ＨＣＴ－８细胞，以无血清ＲＰＭＩ　１６４０培养液洗涤２次，接种于６孔培养板，加入含胡桃醌浓度分别为０．００、１．２５、２．５０、５．００、１０．００和０．００ｍｇ·Ｌ－１的无血清培养基，置于３７℃、５％Ｏ２孵箱内培养７

２ｈ。收集上清，将上清液移入离心管中２　

０００ｒ·ｍｉｎ－１

离心１０ｍｉｎ。调整上样蛋白浓度一致，将样品与５×上样缓冲液混合。配制含１％明胶的分离胶和浓缩胶，待胶凝固后每孔５μＬ上样，４℃、１００Ｖ进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳约．５ｈ。电泳结束后，将凝胶移入２．５％ＴｒｉｔｏｎＸ－００溶液中洗脱２次，每次４０ｍｉｎ，蒸馏水漂洗。将凝胶置于孵育液中３７℃孵育４２ｈ，孵育结束后经考马斯亮蓝染色３ｈ后脱色３～４ｈ直至显示出ＭＭＰ－２（相对分子质量为７２　０００）和ＭＭＰ－９（相对分子质量为９２　０００）位于蓝色背景上的透亮带。将凝胶成像并以Ｇｅｌ　ｐｒｏ　４．０版凝胶光密度分析软件分析累积光密度（ＩＯＤ）参考值，以ＩＯＤ值表示酶活性大小，ＩＯＤ值越低，ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性越小。

．６　Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＭＭＰ

２、ＭＭＰ９蛋白表达水平　实验分组同明胶酶谱法，细胞加药处理２ｈ后分别裂解细胞，离心后取裂解液上清，测定蛋白浓度，３０μｇ蛋白加上样缓冲液于沸水中煮ｉｎ，以１０％ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，电泳完毕半干式转膜，５％无脂奶粉封闭，与待测目的蛋白的特异性抗体孵育杂交，最后以化学发光法显示结果，以Ｇｅｌ　ｐｒｏ　４．０版凝胶光密度分析软件分析累积光密度（ＩＯＤ）参考值，结果以

ＯＤＭＭＰ／ＩＯＤＧＡＰＤＨ表示，比值越小，ＭＭＰ２和ＭＭＰ９蛋白表达水平越低。

．７　统计学分析　采用ＳＰＳＳ　

１７．０统计软件，Ａ值、明胶酶谱ＩＯＤ值及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ＩＯＤＭＭＰ／ＯＤＧＡＰＤＨ值以ｘ±ｓ表示，组间比较采用单因素方

差分析。

１２Ｃ１１１１１Ｃ１１１０２１１１１７５ｍＩ１Ｉ卢　阳，等．Ｔ８细胞黏附及基质金属蛋白酶活性的影响　胡桃醌对人结肠癌ＨＣ－９１

２　结　果

２．１　细胞黏附实验　各浓度胡桃醌处理组随胡桃

醌浓度增加细胞黏附率逐渐降低，与对照组比较各浓度组差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５

）。见表１。２．２　各组ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性　各浓度胡桃醌处理组随着胡桃醌浓度增加，ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性逐渐降低，仅１．２５ｍｇ

·Ｌ－１组ＭＭＰ２的活性变化与对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），其余各组ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性变化与对照组比较

差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表２和图１。２．３　各组ＭＭＰ２和ＭＭＰ９蛋白表达变化　随着

胡桃醌浓度增加，ＭＭＰ２、ＭＭＰ９表达逐渐减少，与对照组比较，各组ＭＭＰ２、ＭＭＰ９表达变化差

异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５

），见表３和图２。表１　各组人结肠癌ＨＣＴ－８细胞黏附率Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＨＣＴ－８ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐ

ｓＧｒｏｕｐ　Ａ　Ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒａｔｅ（η／％）Ｃｏｎｔｒｏｌ　

０．６９±０．１５　

１００．０

Ｊｕｇｌｏｎｅ（ｍｇ·Ｌ－１）　１．２５　０．６１±０．１３＊８８．４　２．５０　０．５３±０．１２＊７６．８　５．００　０．５０±０．１９＊７２．５　１０．００　０．４２±０．１２＊６０．９　２０．００　

０．３０±０．１２＊

４３．５

　　＊Ｐ＜０．０５ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ

．表２　明胶酶谱检测各组ＩＯＤ值

Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ＩＯＤ　ｖａｌｕｅｓ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈｇｅｌａｔｉｎ　ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ　

ａｎａｌｙｓｉｓ（ｘ±ｓ）Ｇｒｏｕｐ　ＭＭＰ２

ＭＭＰ９

Ｃｏｎｔｒｏｌ　５　５２０．００±８３６．９３　１２　００３．３３±１３２．５１Ｊｕｇｌｏｎｅ（ｍｇ·Ｌ－１）

　１．２５　５　６０９．３３±１１３．２９　９　９４２．００±１２７．７４＊　２．５０　４　５６３．００±１４８．３１＊８　６０４．６７±１５３．８１＊　５．００　３　３１６．６７±２５０．０３＊７　７７５．６７±１０９．２５＊　１０．００　２　

４０５．３３±９６．５５＊５　

０５１．３３±７５．５８＊　２０．００　

８７７．６７±１５５．６５＊２　

５９０．３３±１７７．６４＊　　＊Ｐ＜０．０５ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ

．３　讨　论

侵袭、转移是恶性肿瘤的重要特征，也是肿瘤复发、治疗失败最终患者死亡的主要原因。肿瘤侵袭、转移过程复杂，多种机制参与其中，Ｌｉｏｔｔａ

［６］

将这一过程清晰的概括为３步：①细胞与细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　

ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）黏附；②肿瘤细表３　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测各组Ｉ

ＯＤ值Ｔａｂ．３　Ｔｈｅ　ＩＯＤ　ｖａｌｕｅｓ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ

（ｘ±ｓ）Ｇｒｏｕｐ　ＭＭＰ２／ＧＡＰＤＨ　ＭＭＰ９／ＧＡＰＤＨＣｏｎｔｒｏｌ　０．８３±０．１３　２．７９±０．１３Ｊｕｇｌｏｎｅ（ｍｇ·Ｌ－１）

　１．２５　０．６７±０．０２＊１．９８±０．１３＊　２．５０　０．３８±０．０４＊１．４５±０．０７＊　５．００　０．３２±０．０２＊１．１３±０．０３＊　１０．００　０．１９±０．０３＊０．６５±０．０５＊　２０．００　

０．１１±０．０１＊

０．１９±０．０２＊

　　＊Ｐ＜０．０１ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ

．图１　各组ＭＭＰ２和ＭＭＰ９活性检测电泳图

Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ＭＭＰ２ａｎｄＭＭＰ９ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐ

ｓＬａｎｅ　１：Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ

；Ｌａｎｅ　２－６：１．２５，２．５０，５．００，１０．００ａｎｄ０．００ｍｇ

·Ｌ－１　ｊｕｇｌｏｎｅ　ｇｒｏｕｐｓ；Ｐ：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ．图２　各组ＭＭＰ２和ＭＭＰ９蛋白表达水平检测电泳图Ｆｉｇ．２　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＭＭＰ２ｎｄ　ＭＭＰ９ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐ

ｓＬａｎｅ　１：Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ

；Ｌａｎｅ　２－６：１．２５，２．５０，５．００，１０．００ａｎｄ０．００ｍｇ·Ｌ－１　ｊｕｇｌｏｎｅ　ｇｒｏｕｐ

ｓ．胞本身或诱导宿主细胞分泌蛋白水解酶降解基质；③由趋化介导的细胞运动和迁移。

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ

）因其几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白成分和胞外蛋白，从而破坏肿瘤细胞侵袭的组织学

２ａ２９２

吉林大学学报（医学版）　第３８卷　第１期　２０１２年１月

［］孙墨珑，宋湛谦，方桂珍．核桃楸树皮乙醇提取物的成分分２

］）：１析［Ｊ．应用化学，２００８，５（１０２０５１２０７．－［］陈　丽，那顺巴雅尔，张　建，等．胡桃醌对人肝癌Ｂ３ＥＬ－］７４０２细胞增殖和膜流动性的影响［Ｊ．数理医药学杂志，）：１２００９，２２（２４４１４８．－［］Ｓ４ｕｉｅｓＳ，ＯｋａｍｏｔｏＫ，ＲａｈｍａｎＫＭ，ｅｔａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｅｆｆｅｃｔｓ　　　　ｇｙ　

ｏｆｌｕｍｂａｉｎｎｄｕｌｏｎｅｎｚｏｘｍｅｔｈａｎｅｉｎｄｕｃｅｄｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐ　ａ　ｊ　ｏ　ａ－　ｉｙｇｇ］，，／）：ｉｎｒａｔｓ［Ｊ．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ１９９８１２７（１２１７７１８３．ｃａｒｃｉｏｎｅｎｓｉｓ　　　－［］季宇彬，曲中原，奏　响，等．青龙衣中胡桃醌对Ｓ５１８０肉瘤

］：小鼠的抑瘤作用研究［Ｊ．中国药学杂志，２００９，４４（３）１９５１９９．－［］Ｌ６ｉｏｔｔａＬＡ．Ｔｕｍｏｒｎｖａｓｉｏｎｎｄｅｔａｓｔａｓｅｓｒｏｌｅｆｈｅ　　ｉ　ａ　ｍ－　ｏ　ｔ

：ｒｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｏｂｏａｄｓｍｅｍｏｒｉａｌａｗａｒｄｌｅｃｔｕｒｅ［Ｊ］．　　　　，１）：１Ｒｅｓ９８６，４６（１７．Ｃａｎｃｅｒ　－［］Ｋ７ａｔａａｍａＡ，ＢａｎｄｏｈＮ，ＫｉｓｈｉｂｅＫ，ｅｔａｌ．Ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆ　　　　　ｙｐ

ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｒｏｔｅｉａｎａｓｅｉｎｅａｒｌｓｔａｅｏｒａｌｓｕａｍｏｕｓｃｅｌｌ　　　－　　　ｐｙｇｑｃａｒｃｉｎｏｍａａｓｒｅｄｉｃｔｉｖｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｆｏｒｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓａｎｄ　　　　　　　ｐ］，２）：６Ｊ．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ００４，１０（２３４６４０．ｒｏｎｏｓｉｓ［　　－ｐｇ［］丁　岩，陈晓光．基质金属蛋白酶与肿瘤侵袭和转移［］８Ｊ．哈

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］表达对人胰腺癌细胞ＳＷ１９９０侵袭能力的影响［Ｊ．吉林大）：６学学报：医学版，２０１１，３７（４３６６４０．－］７８－。屏障，被认为是侵袭过程中主要的蛋白水解酶［

而明胶酶作为ＭＭＰｓ家族中的成员，因其能够降

解Ⅳ型胶原酶，在多种恶性肿瘤组织中表达升高

［］９１２－，受到广泛关注，其研究较为深入。

本研究中细胞黏附实验结果表明：不同浓度胡桃醌处理７２ｈ后的人结肠癌ＨＣＴ８细胞黏附率下－降，提示胡桃醌在一定浓度可以抑制ＨＣＴ８细胞－黏附；明胶酶谱法检测胡桃醌作用后ＨＣＴ８细胞－分泌ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性结果显示：２．５０～·Ｌ组细胞分泌ＭＭＰ２０．００ｍ２活性明显下降，ｇ

·Ｌ－１组细胞ＭＭＰ１．２５～２０．００ｍ９活性明显下ｇ

－１

降；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ－ｇ检测结果显示：随着胡桃醌浓度的增加，ＭＭＰ２、ＭＭＰ９蛋白表达水平明显降低，ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性和蛋白表达水平下降均呈剂量依赖性，提示ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性下降

可能因其在胞内表达减少所致，这可能是胡桃醌在体外抑制ＨＣＴ８细胞黏附的作用机制。－综上所述，胡桃醌对人结肠癌ＨＣＴ８细胞侵－袭有一定抑制作用，且呈剂量依赖性，其机制可能是通过下调ＭＭＰ２、ＭＭＰ９活性及表达水平，降低ＨＣＴ８细胞降解细胞外基质的能力而发挥作－用。但胡桃醌在体内能否发挥同样作用有待进一步研究，如能证明其疗效及作用机制，将会对抗肿瘤药物的研究和开发发挥重要作用。

［参考文献］

［］许绍惠，唐婉屏，韩忠环．核桃楸毒性成分研究［］１Ｊ．沈阳农

）：３业大学学报，１９８６，１７（２４３９．－《》征订启示吉林大学学报（医学版）

《》（）是中华人民共和国教育部主管、吉林大学主办的综合性吉林大学学报（医学版）原名为《白求恩医科大学学报》》创刊于１吉林大学学报（医学版）中文综合性医药卫医药卫生类学术期刊。《９５９年，经过半个多世纪的发展，现已成为《、《生类核心期刊》中国科技核心期刊》和《医学文摘》等十余种国内外ＲＣＣＳＥ中国权威学术期刊》收录期刊，并被荷兰《著名数据库收录，在国内外具有一定的学术地位和影响。

《》设有基础研究、临床研究、临床医学、影像学、调查研究、方法学和综述等栏目，主要报吉林大学学报（医学版）道医学科学研究的新理论、新方法和新技术，促进医学科学的发展和国内外的学术交流。

《》现为双月刊，国内外公开发行。国内总发行：吉林省报刊发行局；国内订购处：全国各地吉林大学学报（医学版）；国外总发行：中国国际图书贸易集团有限公司报刊采购部（）。邮局（所）邮编１０００４８

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