IL-18真核表达载体的构建及其在HO-8910细胞株的表达

2024-07-29 作者:

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１４４　Ｊ　Ｂｅｎｇｂｕ　Ｍｅｄ　Ｃｏｌｌ，Ｍａｒｃｈ　２００８，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．２　基础医学・　［文章编号］１０００．２２００（２００８）０２－０１４４－０３　・ＩＬ一１８真核表达载体的构建及其在ＨＯ．８９１０细胞株的表达　吴晓莉　，张林杰。。许健　［摘要］目的：通过构建人白细胞介素ｌ８（ＩＬ－ｌ８）真核表达载体，观察其在ＨＯ－８９１０细胞株的表达情况。方法：应用分子克隆技　术将ＩＬ－ｌ８基因插入ｐＣＩ真核表达载体，应用脂质体介导法转染人卵巢癌ＨＯ－８９１０细胞株。转染分３组，空白组：人卵巢癌　ＨＯ－８９１０细胞株＋脂质体；对照组：卵巢癌ＨＯ－８９１０细胞株＋ｐＣＩ；实验组：卵巢癌ＨＯ．８９１０细胞株＋ｐＣＩ．ｈＩＬ．１８。以ＲＴ．ＰＣＲ　方法分别检测３组的ＩＬ—ｌ８表达情况。结果：成功构建ｐＣＩ－ｈＩＬ－１８真核表达载体并转染ＨＯ．８９１０细胞株，ＲＴ．ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ显示　转染ｐＣＩ—ｈＩＬ－ｌ８重组质粒组在转染的细胞内获得表达。结论：ＩＬ－ｌ８基因能够转染到ＨＯ－８９１０细胞株中并获得表达。　［关键词］卵巢肿瘤；白细胞介素－ｌ８；基因，免疫应答；ＨＯ．８９１０细胞株；质粒　［中国图书资料分类法分类号］Ｒ　７３７．３１；Ｒ　３９２．１２　［文献标识码］Ａ　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１８　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１８　ｉｎ　ＨＯ－８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＷＵ　Ｘｉａｏ．１ｉ　，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉｎ－ｊｉｅ　，ＸＵ　Ｊｉａｎ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　Ａｎｈｕｉ　２３００３２；　２．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｎｃｅ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｚｈｅｎｇｊｉａｎｇ　３１００５３，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｃｔ　ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１８（ＩＬ－１８）ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｉｔｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＨＯ－８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１　８　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ｉｎｓｅ￣ｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｐＣ１　ｗｉｔｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ＨＯ一８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｗｉｔｈ　Ｌｉｐｏｔｅｃｔａｍｉｎｅ．Ｔｈｒｅｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ：ＨＯ－８９１０＋Ｌｉｐｏｔｅｃｔａｍｉｎｅ．ＨＯ－８９１０＋ｐＣＩ　ａｎｄ　ＨＯ－　８９１０＋ｐＣＩ－ｈＩＬ－１８．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ－１８　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ｃｏｍｆｉｒｍｅｄ　ｂｙ　ＲＴ—ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｏｆ　ＩＬ－１８（ｐＣＩ－ｈＩＬ－１８）ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ＨＯ－８９１０　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＯ－８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ，ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ　ＩＬ－１８　ｇｅｎｅ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＨＯ－８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ３　ｏｖａｒｉａｎ　ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１８；ｇｅｎｅｓ，ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＨＯ一８９１０　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ；ｐｌａｓｍｉｄｓ　白细胞介素１８（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１８，ＩＬ一１８）是一种重　要的细胞因子，能促进Ｔ淋巴细胞的分化增殖并诱　导ＧＭ—ＣＳＦ、ＩＬ－２和ＴＮＦ—Ｏ／．等细胞因子的产生，增强　Ｆａｓ介导的Ｔｈｌ型细胞的细胞毒性及ＮＫ细胞、ＣＴＬ　细胞的细胞毒作用等多种生物学功能¨　。在抗肿　瘤、抗感染及免疫调节等方面发挥重要的生物学活　性。尤其是其独特的免疫增强功能，更使得其在肿　室提供）。ＤＮＡ　Ｍａｋｅｒ、Ｏｎｅ　Ｓｈｏｔ　ＰＣＲ试剂盒、限制　性内切酶和Ｔ４连接酶（ＴａｋａＲａ公司）；ＲＮＡ提取试　剂盒、ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ　ＩＩ反转录试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）；　ＤＮＡ纯化、回收试剂盒（上海生物工程有限公司）；　筛选药ＧＥＮＥＴＺＣＩＮ（Ｇ＿４１８　Ｓａｆｃｅ）（ＧＩＢＣＯ公司）；　Ｌｉｐ０ｔｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ公司）；人ＩＬ－ｌ　８　ＥＬＩＳＡ试剂盒（上海卓康生物科技有限公司）。其　它试剂均为国产分析纯。　１．２　方法　瘤治疗领域倍受关注。本研究旨在构建人ＩＬ．１８真　核表达载体，并观察其在人卵巢癌细胞ＨＯ一８９１０中　的表达，为卵巢癌的免疫基因治疗提供实验基础。　１材料与方法　１．２．１　ＩＬ一１８真核表达载体的构建（１）ｈＩＬ．１８的　亚克隆。以ｐＧＥＭ—ｈｌＬ一１８（３　７５０　ｂｐ）为模板，在ｈｌＬ—　ｌ８基因的两端设计引物，上游引物Ｐ１：５　－ＧＣＧ　ＡＡＴ　ＴＣＡ　ＴＧＴ　ＡＣＴ　ＴＩ＇Ｇ　ＧＣＡ　ＡＧＣ　ＴＩ＇Ｇ　ＡＡＴ　Ｃ－３　，下游　引物Ｐ２：５　一ＣＣＧ　ＴＣＧ　ＡＣＧ　ＴＣＴ　ＴＣＧ　ＩＴ１－ｒ　ＴＧＡ　ＡＣＡ　ＡＴＧ－３　，在上下游引物中分别引入ＥｃｏＲ　Ｉ和Ｓａｌ　Ｉ　酶切位点，进行ＰＣＲ。拟扩增的ＩＬ．１８基因长度为　１．１材料与试剂ｐＧＥＭ—ｈｌＬ一１８质粒，大肠埃希菌　ＤＨ５ｏＬ，人卵巢癌ＨＯ一８９１０细胞株，ｐＣＩ载体（５　４７２　ｂｐ）（由浙江中医药大学生命科学院临床检验教研　［收稿日期］２００７．１０．１２　［基金项目］浙江省科技攻关计划项目重点科研社会发展项目　（２００６Ｃ２３０２４）　５８１　ｂｐ，添加酶切位点后，ＰＣＲ产物的长度为５９７　ｂｐ。ＰＣＲ反应条件：９４　ｃ【＝５　ｍｉｎ；９４　ｃ【＝３０　ｓ，５４．６　ｃ【＝　３０　ｓ，７２　ｃ【＝３０　ｓ，３０个循环；７２ｃ【＝１０　ｍｉｎ。反应体积　为２５　ｌ。（２）ＰＣＲ产物纯化与ｐＣＩ质粒提取，按试　［作者单位］１．安徽医科大学免疫学教研室，安徽合肥２３００３２；　２．浙江中医药大学生命科学学院，浙江杭州３１００５３　［作者简介］吴晓莉（１９７５一），女，讲师．　［通讯作者］张林杰，男，研究生导师，教授．　剂盒说明书进行。（３）ｐＣＩ．ｈＩＬ．１８真核表达载体的　构建。ＰＣＲ产物、ｐＣＩ质粒分别经Ｓａｌ　Ｉ和ＥｃｏＲ　Ｉ　维普资讯 维普资讯

１４６　Ｊ　Ｂｅｎｇｂｕ　Ｍｅｄ　Ｃｏｉｌ，Ｍａｒｃｈ　２００８，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．２　将某些细胞因子或黏附分子的基因转染到机体免疫　瘤性发生了怎样的变化？将有待于进一步研究。　［　参　考　文　献　］　［１］朱林．白细胞介素ｌ８与肿瘤［Ｊ］．国外医学・免疫学分册，　２００４，２７（３）：１６４—１６７．　细胞或癌细胞中，以提高机体免疫系统对肿瘤细胞　的识别和反应能力。目前在卵巢癌基因免疫治疗方　面研究较多的细胞因子是ＩＬ．２，但ＩＬ．１８用于卵巢　癌基因免疫治疗的报道尚少见。研究证明肿瘤的发　［２］Ｍｉｃａｌｌｅｆ　ＭＪ，Ｔａｎｉｍｏｔｏ　Ｔ，Ｋｏｈｎｏ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　１８　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｔｏ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ　ｍｉｃｅ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　生与ＩＬ．１８作用受损有关　Ｊ，Ｗａｎｇ等　通过对正常　卵巢上皮和卵巢癌上皮ＩＬ．１８表达检测表明正常卵　巢上皮能够表达ＩＬ．１８，但癌变的卵巢癌上皮则丧失　Ｍｅｔｈ　Ａ　ｓｒｃｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒａ　Ｒｅｓ，１９９７，５７（２Ｏ）：４　５５７—４　５６３．　［３］Ｘｉａｎｇ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｚ，Ｈｕａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ　ｍｙｅｌｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－・ｇａｍｍａ－・ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　这种功能。黄啸等　通过ＩＬ．１８对卵巢癌细胞系　ＨＯ・８９１０抗肿瘤作用的研究认为ＩＬ．１８能诱导外周　ｂｏｔｈ　ＣＤ４（＋）／ＣＤ８（＋）Ｔ　ａｎｄ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　以Ｒｅｓ，　２００１，１０（２５）：９０９—９１５．　血单核细胞分泌ＩＦＮ．　因子，提高单核细胞对ＨＯ．　［４］　Ｋｉｙｏｓｈｉ　Ｙ，Ｓｈｏｉｃｈｉ　Ｈ，Ｎｏｒｉｏ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅ　８９１０卵巢癌细胞系的杀伤率及抑制卵巢癌细胞的　ｔｈｅｒａｐｙ　ｕｓｉｎｇ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ（ｃｏｌｏｎ　２６）ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｗｉｔｈ　生长。但是将ＩＬ・１８基因直接转染卵巢癌细胞观察　ｐｌａｓｍｉｄ　ｖｅｃｔｏｒ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｍａｔｕｒｅ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１８　ｃＤＮＡ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ＩｇＫ　其抗肿瘤作用的报道却很少见。　ｌｅａｄｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ，２００１，８（１）：９—１６．　本研究成功构建了人ＩＬ．１８真核表达载体，通　【５］包珊，杨舒盈，符生苗，等．ＩＬ－１８基因的克隆及其在官颈癌　细胞中的表达研究［Ｊ］．中国热带医学，２００３，３（５）：５７１—５７３．　过Ｌｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００介导法将人ＩＬ．１８基因转导人卵　［６］　韩明勇，于金明，郭其森，等．白细胞介素一１８转导人大肠癌细　巢癌细胞系中，筛选出阳性克隆。ＲＴ．ＰＣＲ结果表　胞株的建立及其生物学活性的研究［Ｊ］．肿瘤防治杂志，２００３，　明，转入的人ＩＬ．１８基因在卵巢癌细胞中能稳定表　１０（８）：８０９—８１０．　达ｍＲＮＡ。空载体转染的肿瘤细胞和未转染的肿瘤　［７］Ｋｏｂａｓｈｉ　Ｋ，１ｗａｇａｋｉ　Ｈ，Ｙｏｓｈｉｎｏ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ—ｌ８　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　细胞均未检测到ＩＬ．１８基因的ｍＲＮＡ。ＥＬＩＳＥ方法　Ｒｅｓ，２００１，２１（５）：３　２８５—３　２９３．　检测各组细胞上清液ｈｌＬ．１８含量，转ｐＣＩ．ｈｌＬ．１８质　［８］ＷａｎｇＺＹ，ＧａｇｇｅｒｏＡ，Ｒｕｂａｒｔｅｌｌｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一　粒的实验组检测到ｈｌＬ・１８，而对照组和空白组均未　１８　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｏｖａｒｉａｎ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ：　检测到ｈｌＬ．１８的表达。说明在转染重组质粒的人　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．，ｎｆ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，　卵巢癌ＨＯ．８９１０细胞株中ＩＬ．１８在ｍＲＮＡ水平和蛋　２００２，９８（６）：８７３—８７８．　［９］　黄啸，周决，张凤坤，等．ＩＬ一１８对卵巢癌细胞系抗肿瘤作　白水平均获得表达，为卵巢癌的基因免疫治疗提供　用的研究［Ｊ］．中国癌症杂志，２００２，１２（２）：１０６—１０９．　了实验基础，但转染后肿瘤细胞的生物学活性或致　（上接第１４３页）　致恶性胸水抑或类癌性胸水。　在胸水细胞学和ＬＵＮＸ基因检、狈０的比较研究　［　参　考　文　献　］　中，细胞学检测阳性者，ＬＵＮＸ基因均呈阳性，细胞　［１］１ｗａｏ　Ｋ，Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｔ，Ｆｕｊｉｗａｒａ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｈｕｍａｎ　学检测阴性胸水标本，ＬＵＮＸ基因仍有部分呈现阳　ｌｕｎｇ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅ，ＬＵＮＸ，ａ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｍｏｌｅｃｕｌｒａ　ｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　性，提示胸水ＬＵＮＸ基因检查可以弥补细胞学的不　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｉｎ　ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ—ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．，ｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９１（４）：４３３—４３７．　足。细胞学检测阳性率不高的原因，可能由于恶性　［２］　Ｗｏｎｇ　ＬＳ，Ｃａｎｔｒｉｌｌ　ＪＥ，Ｏｄｏｇｗｕ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　细胞在胸水环境中易受某些因素影响而变形，难与　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｎｏｄａｌ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｂｙ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—　间皮细胞或炎性增生细胞鉴别，降低了检测阳性率，　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ［Ｊ］．酐Ｊ　Ｓｕｒｇ，１９９９，８４（６）：　提示对于胸水细胞学阴性而ＬＵＮＸ基因阳性者，应　８３４—８３９．　高度怀疑胸水系肺癌胸膜转移所致，应反复进行胸　［３］　Ｂｏｄｅｎｍｕｅｌｌｅｒ　Ｈ．Ｔｈｅ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　ＣＹＦＲＡ　２１—１　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ　ｔｅｓｔｓ［Ｊ］．Ｓｔａｎｄ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｌａｂ／ｎｖｅｓ，１９９９，５（３）：６１—　水送检及其他检查，以防漏诊。本研究中有５例肺　７３．　癌胸水标本ＬＵＮＸ基因及细胞学检测均为阴性，在　［４］　高云朝，王美琴，陆云，等．血清肿瘤标志物的检测对肺癌患者的　复查中，１例经胸膜活检证实为肺癌，主要考虑发生　诊断价值［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００５，２８（４）：２６８—２６９．　胸膜侵袭的癌细胞脱落入胸水呈间断性，先前脱落　［５］Ｍｉｔｓａ　Ｍ，Ｈｏｏｖｅｒ　Ｌ，Ｓｉｌｖｅｓｔｒｉ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．ＬＵＮＸ　ｉｓ　ａ　ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　入胸水的癌细胞已呈溶解状态，ＬＵＮＸ　ｍＲＮＡ检测　ｂｌｏｏｄ［Ｊ］．ＪＭｏｌ　Ｄｉａｇｎ，２００３，５（４）：２３７—２４２．　不出，而４例两项检查均为阴性胸水标本，考虑为类　［６］　邵康，赫捷，程邦昌，等．ＲＡＳＳＦ１基因不同转录本在肺癌　癌性胸水。胸水ＬＵＮＸ基因检测，除可鉴别侵袭胸　组织中的转录表达及临床意义［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００３，２５　膜的癌细胞系肺源性抑或其它组织来源外，对肺癌　（２）：１４９—１５２．　伴胸水的患者，尚可鉴别胸水系癌细胞侵袭胸膜所　［７］　朱广迎，刘德林，陈杰．肺癌患者三种微转移标志物临床意义的　比较研究［Ｊ］．中华放射肿瘤学杂志，２００３，１２（３）：１７８—１８２．