e8基因产物LRP、GSTπ、TopoⅡ表达及临床意义

2024-07-29 作者:

５０１２．如９３（２５（０２的．ｏ）８．．０６（１３９６７．）２．．３７（６０３６６．３（．３０５＇６４５２０（．４５３４（４０５胃癌组织中多药耐药基因产物ＬＲＰ、ＧＳＴ一仃、ＴｏｐｏＩＩ表达及临床意义赵大华，田东，于宁。朱玉红。吕增华（滨州医学院附属医院，山东滨州２５６６０３）摘要：目的探讨（ＭＤＲ）基因产物ＬＲＰ、ＧＳＴ－ｃｒ、ＴｏｐｏⅡ在胃癌多药耐药（ＭＤＲ）发生中的作用，为胃癌化疗药物的选择提供依据。方法应用免疫组化ＳＰ法检测１５６份胃癌组织中ＬＲＰ、ＧＳＴ－１ｒ和ＴｏｐｏｌＩ表达并分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中ＬＲＰ、ＧＳＴ．１Ｔ和Ｔｏｐ０１Ｉ阳性率分别为“．１％、６１．５％和５０％，与性别、肿瘤大小、部位、临床分期及浸润深度无明显关系（Ｐ＞０．０５）；高、中分化腺癌ＬＢＰ阳性率明显高于低分化腺癌（Ｐ＜０．０５）；ＧＳＴ．１Ｔ和ＴｏｐｏⅡ表达与胃癌淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５）；印戒细胞癌ＴｏｐｏⅡ阳性率明显低于其他组织学类型（Ｐ＜０．０５）。结论ＬＲＰ、ＧＳＴ－１ｒ及ＴｏｐｏⅡ在胃癌ＭＤＲ发生中起重要作用；三者联合检测有助于胃癌化疗药物的选择及预后判断。关键词：胃肿瘤；多药耐药基因；肺耐药相关蛋白；谷胱甘肽－ｓ－转移酶霄；拓扑异构酶ＩＩ；免疫组织化学中圈分类号：Ｒ７３５．２文献标志码：Ｂ文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１１）０７－００５８－０２多药耐药（ＭＤＲ）是导致恶性肿瘤病化疗失败的常见原因…；肺耐药相关蛋白（ＬＲＰ）过度表达、谷胱甘肽－ｓ．转移酶叮ｒ（ＧＳＴ一霄）活性增强、拓扑异构酶Ⅱ（Ｔｏｐｏ１Ｉ）水平降低是ＭＤＲ产生的重要机制。２００９年１月～２０１０年１月，我们采用免疫组化法检测了１５６份胃癌组织中ＬＲＰ、ＧＳＴ一霄、ＴｏｐｏⅡ的表达情况并分析其与胃癌病理特征的相关性，探讨其在胃癌ＭＤＲ多药耐药发生中的作用。１材料与方法１．１胃癌组织中ＬＲＰ、ＧｓＴ．１『和ＴｏｐｏⅡ表达阳性率分别为６４．１％、６１．５％和５０％。其表达与临床病理特征的关系见表１。表１ＬＲＰ、ＧＳｒ－订和ＴｏｐｏⅡ表达与胃癌临床病理特征的关系临床病理特征弗篇嚣笋Ｐ值嗡高性Ｐ值≮嬲性Ｐ值性别霎女肿瘤直径（Ｏｒｅ．）≥５＜５１。２，１３５．，；．嫩．．７）６３（５２．Ｉ）…。。；ｏ．１ａ１８１５∞（４２１如弘．９）…。２９（４２材料收集我院２００７年一２００８年手术切除的胃癌组织标本共１５６份，患者男１２１例，女３５例；年龄２５—８１岁，平均５６．９岁。均经病理检查确诊。按ＴＮＭ标准分期，术前未行化疗、放疗。１．２８７“５６。（∞６４．．４。；。．舛５０（５７．．：５；。．Ｍ“（６３．８）…。．２）…。４８（５５７．）…～０；。．・。ｓ９；ｏ．４４１２部位胃窦部胃体部贲门部全胃ＴＮＭ分期Ｉ＋ⅡⅢ＋Ⅳ５１虬挎酊ｎ∞佰撕０５０（６１．７）０３５（４３．２）ＬＲＰ、ＧＳＴ一１Ｔ和ＴｏｐｏⅡ表达检测采用免疫组；、；８２加５７８（．）２２４８（．）酊¨卯铊７７（６３．６）６（５４．５）化法。标本经１０％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋；制成４斗ｍ连续切片，染色程序按试剂盒说明书进行。已知结肠癌阳性片为阳性对照，ＰＢＳ代替一抗为阴性对照。鼠抗人ＬＲＰ、ＧＳＴ一１Ｔ和ＴｏｐｏＩＩ单克隆抗体、ｓＰ免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。结果判定：细胞质、细胞核或细胞膜出现３１（６０．．８；ｏ．５５７６９（６５．）…。６９５５（５２．４）…‘６５（６１．）…７组织学类型管状腺癌黏液腺癌印戒细胞癌分化程度低分化高、中分化浸润深度１２６２４８２（６５．１）８１（６４．３）６４（５０．８）１５（６２．５）Ｏ．７４１２（５０．０）０．３５１１（４５．８）０．０５３（５０．０）３（５０．０）ｏ（ｏ．ｏ）棕黄色颗粒为阳性细胞，高倍镜下计数５个视野或ｌ０００个细胞，阳性细胞数≥１０％为阳性，否则为阴鬟４４（５１．２）ｏ．０２２５３（６２．４＿：ｏ．５１；仉５１２１（５１．２｛ｏ．９５；ｎ４ｌ仉９５２８（６８．３性。其中ＬＲＰ阳性颗粒分布于细胞质。ＧＳＴ一１『阳性颗粒分布于细胞质和（或）细胞核，ＴｏｐｏＩＩ阳性颗粒分布于细胞核。１．３统计学方法采用ＳＰＳＳ１０．０统计软件。行ｘ２检验，Ｐ≤ｏ．０５表示差异有统计学意义。２结果５８誊镞及黏膜下层肌层浆膜层淋巴结转移有无１４１１（７８．６）９（６４．３）５（３５．７）６（３１．６）０．１６６４（５２．０）１９１２３１３（６８．４）Ｏ．４２１３（６８．４）０．７７７６（６１．８）７４（６０．２）１４５２７１１４５０‘撕７３（㈣６５．８）蝴８０（７２．１｛２７㈨ｏｊＪ０．０２５，ｏ．２９（６４．４）ｏ．０２８３讨论化疗广泛用于胃癌术后辅助治疗及术后复发、转移、晚期不能切除病例的姑息治疗，亦用于新辅助化疗。胃癌化疗的有效率较低，与肿瘤细胞产生耐药性有关。ＭＤＲ是指胃癌细胞同时对多种结构和作用机制不同的化疗药物产生交叉耐药，其机制仍不清楚。ＭＤＲ的产生不是单一因素，而是多种机制共同作用的结果，符合肿瘤耐药的多基因学说¨＇２】。人类基因组中有两个ＭＤＲ基因，即ＭＤＲｌ和ＭＤＲ２。研究表明，ＭＤＲｌ基因的表达水平与人体肿瘤细胞的耐药有关。ＬＲＰ、ＧＳＴ一盯、ＴｏｐｏⅡ均为耐药基因标志物，可间接反映胃癌组织中ＭＤＲｌ基因的表达。ＬＲＰ是人类的穹隆体主蛋白，在正常组织和肿瘤细胞中广泛分布，控制着多种底物的双向核质转运。其耐药机制为通过调节囊泡和核质的药物转运，将化疗药物储存于囊泡，并减少胞核与胞质问的比例。文献报道，ＬＲＰ过度表达与多类药物耐药有关，如顺铂、阿霉素、依托泊甙、长春新碱等。本研究表明ＬＦｕＰ在胃癌中高表达，高、中分化腺癌中表达明显高于低分化腺癌；提示ＬＲＰ过度表达在胃癌ＭＤＲ中起重要作用；高、中分化腺癌更易产生耐药。此与临床上低分化腺癌化疗效果相对较好相吻合，亦与文献报道相似Ｈｊｌ。人类谷胱甘肽，Ｓ一转移酶（ＧＳＴｓ）是一组与机体解毒作用有关的药物代谢酶类，其中ＧＳＴ一订约占总数的９０％，主要分布于消化道、泌尿系统和呼吸道上皮。ＧＳＴ一叮ｒ可催化亲电化合物如烷化剂等抗癌药物与还原型谷胱甘肽结合，使其水溶性增加，更易排出体外，也可使亚硝基脲类药物脱亚硝基，清除阿霉素和其他抗癌药物产生的过氧化物，还可通过自身结合细胞毒物质来保护细胞。因此，ＧＳＴ一，ｆｆ表达越强，肿瘤细胞对化疗药物的耐受性就越强。ＧＳＴ一面主要介导与顺铂及阿霉素相关的耐药。Ｚｈｕ等［６１报道在食管癌及癌前病变中ＧＳＴ一叮ｒ的表达明显增高。本研究结果显示，ＧＳＴ一耵在胃癌呈高表达，且有淋巴结转移者表达明显高于无淋巴结转移者。此与文献报道＂１相似，亦表明ＧＳＴ一订高表达预示着胃癌转移率高，预后差。ＤＮＡ拓扑异构酶多存在于核仁，是催化ＤＮＡ双链拓扑异构体相互变化的酶系，分为Ｉ型和Ⅱ型，在ＤＮＡ的合成、转录、核分裂过程及染色体分离中起重要作用。其中ＴｏｐｏＩＩ是多种抗癌药物的作用靶点，其表达的下调或性质改变都会影响ＤＮＡ交链复合物的形成，降低化疗药物的敏感性，这与Ｐ一糖蛋白、ＧＳＴ一＇ｉＴ过度表达所引起的经典耐药明显不同。Ｃｈｉｋａｍｏｒｉ等【８１在对酶活性研究中发现ＴｏｐｏＨ突变对胺苯吖啶和ＶＰ—１６有较强的耐药性。以ＴｏｐｏＩＩ为靶酶的化疗药物的主要作用机制：①通过与Ｔｏｐｏ１１一ＤＮＡ结合成稳定的断裂复合物，促使ＤＮＡ断裂并阻止ＴｏｐｏⅡ对断裂链的再连接，导致ＤＮＡ断链的错误修复，激发细胞死亡的生化过程；②抑制Ｔｏ—ｐ０Ⅱ活性。因此，ＴｏｐｏＩＩ介导的耐药性的基础即在于ＴｏｐｏｌＩ含量减少和（或）活性降低一Ｊ。本研究显示，胃癌组织中ＴｏｐｏＩＩ表达阳性率仅为５０％，且与肿瘤的组织学类型和淋巴结转移相关，与关云艳等¨刚报道一致。亦说明未经化疗的胃癌存在着较高的原发性耐药，且易转移，预后差。总之，ＬＲＰ、ＧＳＴ．订和ＴｏｐｏⅡ三者引起的耐药机制各不相同，说明胃癌的ＭＤＲ存在着多种机制。上述这三种耐药基因表达与胃癌生物学特征具有相关性；对其进行联合检测可指导临床合理选择化疗药物并正确判断预后。参考文献：［１］Ｓｔａｒｒｏｖｓｋａｙａ从．Ｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｔｕｍｏｒｃｅｉｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｔ），２０００，６５（１）：９５—１０６．［２］陈慧玲．肿瘤多药耐药的研究进展［Ｊ］．临床肿瘤学杂志。２００８。１３（５）：４７５－４７７．［３］ＳｃｈｅｐｅｒＰｄ，Ｂｍ毗ｅｒｍａｎ町，￥ｃｈｅｆｆｅｒＣＬ，ｅｔａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ８Ｍ（ｒ）１１００００ｖ∞ｉｃｍ缸ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｎｏｎ—Ｐ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄｍｕｈｉｄｍｇｍａｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９３，ｓ３（７）：１４７５－１４７９．［４］李海，郑春宁，薛强。等．胃癌组织中的肺耐药蛋白、Ｐ一糖蛋白、符胱甘肽－Ｓ－转移酶以及拓扑异构酶Ⅱ的表达及意义［Ｊ］．中华实验外科杂志，２００５，２２（１）：５８－５９．［５］ＳｈｉＨ，ＬｕＤ，ＳｈｕＹ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ一静ｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＰ－＃ｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ—Ｓ—ｔｌ＂ａｌｌｓｆｅｌ＇ａｓｅｓ，ｔｏｐｏｉ・８０ｍ锄ｅ－ＩＩａｎｄｌｕｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎｉｎｐｒｉｍａｒｙｇａｓｔｒｉｃｃ＆ｒｄｉｓｃｃａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＩｎｖｅｓｔ，２００８，２６（４）：３４４＿３５１．［６］Ｚｈｕｘ，ｚｈ８ｌＩｇｓＨ，ＺｈａｎｇＫＨ，ｅｔａ１．Ｖａｌｕｅｏｆｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃｍｅｔｈｙｌ—ｅｒｉｅｂｌｕｅａｎｄＬｕ９０ｌ§ｉｏｄｉｎｅｄｏｕｂｌｅｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＧＳＴ—ＰｉａｎｄｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌＯＡＨｃｃｉｎｏｎｌａ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｗｌ，２００５，１１（３９）：６０９０－６０９５．［７］秦芳，秦霞，张霞，等．Ｐ糖蛋白、谷胱甘肽一ｓ－转移酶和拓扑异构酶Ⅱ在胃癌组织中的表达［Ｊ］．癌症，２００２，２１（２）：１６７—１７０．［８］ＣｈｉｋａｍｏｒｉＫ，ＧｒａｂｏｗｓｋｉＤＲ，ＫｉｎｔｅｒＭ，ｅｔａ１．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｉｎｅ１１０６ｉｎｔｈｅｃａｔａｌｙｔｉｃｄｏｍａｉｎｏｆｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅＩＩａｌｐｈａｒｅｇｕ—ｌａｔｅｓｅｎｚｙｍａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｒｕｇ８ｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８（１５）：１２６９６—１２７０２．［９］杜舟．耐药基因在胃癌化疗中的研究进展［Ｊ］．浙江临床医学，２００６，８（４）：４３９－４４０．［１０］关云艳，欧希龙，郭庆明，等．Ｐ－ｇｐ、ＴｏｐｏＩＩ和ＧＳＴ一霄在胃癌组织中的表达及与预后的关系［Ｊ］．世界华人消化杂志，２００６，１４（３ｓ）：３３７１－３３７６．（收稿日期：２０１０．１１．１２）５９