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2024-07-29 作者:

临床和实验医学杂志2010年4月 第9卷 第7期 ・499・ 新疆哈萨克族冠心病患者eNOS基因G894T多态性分析 陈春丽 江雪萍 (1新疆奎屯农七师医院; 2新疆奎屯农七师疾控中心新疆奎屯833200) 【摘要】 目的探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性与冠心病的相关性。方法应用 聚合酶链反应(PCR)一限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP),检测新疆哈萨克族70例健康个体和87例冠心病患 者eNOS基因G894T多态性。结果 新疆哈萨克族健康个体及冠心病患者的eNOS基因G894T多态性GG、GT、1Tr基因 型频率分布分别为51.43%、30.00%、18.57%和24.14%、55.17%、21.69%,G和T等位基因分布频率分别为75.71%、 24.29%和56.32%、43.68%,冠心病患者存在G等位基因频率下降,T等位基因频率升高趋势。结论 eNOS基因 G894T多态性分析,与新疆哈萨克族冠心病有相关性。 【关键词】冠心病哈萨克族内皮型一氧化氮合酶基因基因多态性 Study on polymorphism of eNOS gene G894T in Kazak patients with CHD in Xinjiang.CHEN Chun—li 。Jiang Xue—ping2.1 NongQiShi Hospital ofKuitun;2 Center ofD ̄ease Control in Nongqishi Kuitun Xingfiang,Kuitun Xinjiang 833200,China. 【Abstract】Objecfive To study the relationship between coronary heart disease(CHD)and polymorphism of gene of nitric oxide synthase (eNOS G894T)in Kazaks in Xi ̄iang.Methods The eNOS gene related polymorphism of G894T was detected by polymerized chain reaction— restriction fragment length polymorphism(PCR—RFLP)in 70 cases of CHD and 87 healthy subjects.Results Result of tests showed that fre— quencies of GG,GT and.rr of eNOS gene were 51.43%,30.00%,18.57%and 24.14%,55.17%,21.69%in healthy group and CHD group respectively.The allele ̄equencies of G and T were 75.71%,24.29%and 56.32%,43.68%respectively.Allele ̄equency of G was descen- ded in CHD Datients and allele frequency of T had been raised in CHD patients.Conclusions It can be concluded as that the allele frequency of polymorphism of G894T of eNOS gene is correlated with CHD patients in Kazaks in Xinjiang. 【Key words】 Coronary heart disease;Kazak;Nitric oxide synthase gene;Polymolphism of gene 冠心病(coronary hearase disease,CHD)是由遗传和 天美有限公司。 环境因素共同作用所致的复杂疾病,发病过程与多基因 1.3 DNA的提取低渗溶血法破红细胞,采用蛋白酶 之间和基因一环境之间的相互作用等有关。本研究以 K消化,饱和酚/氯仿抽提法提取白细胞基因组DNA,最 新疆哈萨克族冠心病患者为研究对象,对其内皮型一氧 后加TE溶解DNA,一2O℃下放置,检测时BioRad紫外 化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性进行研究,以期阐 分光光度计测定DNA浓度并标化至100 ng/ l。 明eNOS基因G894T多态性在冠心病中的分布及其在 1.4 多聚合酶链反应检测eNOS基因G894T多态性 发病中的作用。 1.4.1引物设计与合成参照文献[1]设计引物:primer 1材料与方法 上游引物5 一AAGGCAGGAGACAGTGGATGGA一3 下游 1.1研究对象 弓f物:5 一CCCAGTCAATCCCT兀、GGTGCTCA一3,n 1.1.1 选择标准 病例符合1997年世界卫生组织 1.4.2 PCR扩增反应体系为25 l,包括DNA模板 (WHO)冠心病诊断标准且心电图检查均为陈旧性心肌 1.0 Ixl,10×反应缓冲液(Mg“)2.5 l,dNTPMix 2.0 梗死患者。健康对照组排除心、脑、肾、内分泌、精神系 l,primer F引物0.2 l,primer R引物0.2 l,Taq酶 统疾病。受试者同时具备以下条件:新疆地区出生或常 0.2 ILl,纯净水18.9 txl。 住,种族明确,彼此无血缘关系。 1.4.3 PCR仪扩增反应条件预变性为95℃2 min, 1.1.2病例选择哈萨克族冠心病人87例,男性39 变性95℃30 s,退火66℃30 s,延伸72c【=30s,共37个 例,女性48例,平均年龄(47.9±8.4)岁。病例来自 循环,最后72℃延伸5 min。扩增后的PCR产物为248 2006年10月至2009年11月伊犁州医院、新疆维吾尔 bp,经2.5%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,100 V,30 rain, 自治区人民医院、新疆奎屯农七师医院住院患者。 置凝胶成像仪上观察特异性条带,打印并记录了实验结 1.1.3健康对照组哈萨克族健康志愿者70例,男性 果。 31例,女性39例,平均年龄(39.8±6.4)岁。 1.4.4基因型检测限制性酶切反应体系10 l,包括 1.1.4标本制备各抽取静脉血3 ml,乙二胺四乙酸 PCR产物8.4 Ixl、10×缓冲液1 l、BaII内切酶(大连宝 二钾(EDTAK:)抗凝,充分混匀, 生物工程有限公司提供)0.6 l,37℃酶切2 h终止。酶 1.2主要仪器MastercyclerR eppendorf PCR仪(梯度 切产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪成像,观 核酸扩增仪)购自上海艾本德生物技术国际贸易有限公 察基因型。 司;2.5%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,上海生物工程有限 1.5 统计学处理计算新疆哈萨克族健康人群和冠心 公司试剂盒;UVP AC暗箱+GEL相机凝胶成像仪购自 病患者两组基因型频率和等位基因频率,经过Hardy ・500・ Journal ofClinical and Experimental Medicine Vo1.9.No.7 apr.2010 Weinberg遗传平衡定律检验,表明各基因型频率已达遗 频率分布分别为51.43%、30.00%和18.57%,G和T 传平衡,具有群体代表性。各组间频率比较用x 检验。 等位基因分布频率分别为75.71%和24.29%;新疆哈 P<0.05为差异有统计学意义。 萨克族冠心病人eNOS基因G894T多态性GG、GT、q3" 2结果 基因型频率分布分别为24.14%、55.17%、20.69%,G G等位基因存在Ban II酶切位点,而T 和T等位基因分布频率分别为56.32%和43.68%。冠 2.1 电泳结果等位基因没有Ban II酶切位点。因此GG基因型酶切 心病患者有G等位基因频率下降,T等位基因频率升高 产物为163 bp和85 bp,GT基因型具有248 bp和163 趋势。经x 检验,差异显著(基因型频率:x =13. bp,1Tr基因型酶切产物为248 bp。结果见图1。 6559,P<0.05;等位基因频率:x =8.86,P<0.05), 表明eNOS基因1Tr型及T等位基因与冠心病有相关 Sl ld31 851T 图1 哈萨克族冠心病人PCR产物及经BanII酾切后琼脂椐凝胶电泳 注:M为标记物;1~6为PCR扩增产物;2、、4…6为GG基因型;3、为 GT基因型;1、5、为1Tr基因型。 2.2 新疆哈萨克族健康人群eNOS基因频率 在 70例健康对照者样品中,GG型36例,GT型25例, TT型9例;三种基因型的频率分别为51.43%、30. 00%和1 8.57%;G和T等位基因分布频率分别为 75.71%和24.29%。经x 检验,这些比例与Hardy Weinberg平衡相一致(x =0.9101,P>0.05),具有 群体代表性。等位基因频率分布男女问无显著性差 异(x =0.1833,P>0.05)。见表1。 表1 新疆哈萨克族健康人群eNOS基因型及等位基因频率分布 性别 n 例数与基因型频率(%) 等位基因频率(%) 男 31 16(15.94)9(9.3) 6(5.76) 77.42 22.58 女 39 2O(2O.O6)12(11.7)7(7.24) 74.35 25.64 合计 70 36(51.43)21(30.00)13(18.57) 75.71 24.29 2.3 新疆哈萨克族冠心病人eNOS基因频率 在 87例CHD患者样品中,GG型21例,GT型48例,TT 型18例,三种基因型的频率分别为24.14%、55. 17%和20.69%,G和T等位基因的频率分别为56. 32%和43.68%。经x 检验,这些比例与Hardy Weinberg平衡相一致(x =1.4455,P>0.05),具有 群体代表性。等位基因频率分布男女间无显著性差 异( =0.6543,P>0.05)。见表2。 表2薪疆哈萨克族冠心病人eNOS基因型及等位基因频率分布 2.4新疆哈萨克族eNOS基因G894T多态性分布新 疆哈萨克族健康人G894T多态性GG、GT、Tr基因型 性。见表3。 表3新疆哈萨克族冠心病人及健康人群eNOS基因 G894T多态性分布比较 组别 — G T CHD组87 21(24.14)48(55.17)18(20.69) 56.32 43.68 对照绢 70 36(51.43)21(30.oo)13(18.57) 75.71 24.29 3讨论 内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)是左旋精氨酸一氧 化氮途径的关键酶,eNOS催化生成的NO具有舒张血 管、调节血流、抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移和清除超 氧自由基、抑制血小板聚集、粘附和白细胞的趋化激活 等重要功能,是心血管系统抗动脉粥样硬化、防止血栓 形成和维持正常血管舒缩反应中必不可少的保护因 子 ]。有研究发现eNOS基因第7外显子中的G894T 突变和冠心病的发病及心肌梗死有相关性 。但也有 研究显示该变异与冠心病的发病无相关关系 。Co- lambo等 6 的研究显示G894T碱基突变与意大利人冠 心病的存在和严重程度相关。eNOS基因分布不同,存 在种族差异H 。 本研究发现新疆哈萨克族冠心病人中存在eNOS 基因G894T多态性:GG基因型频率下降,GT、q3"基因 型频率升高趋势,G等位基因频率下降而T等位基因频 率升高趋势。 4结论 本项研究结果显示,与对照组相比,冠心病在基因型 和等位基因频率分布两方面均有显著性差异(P<0. 05)。表明eNOS基因G894T多态性,与新疆哈萨克族冠 心病有相关性。 参考文献 [1] Benjafield AV,Morris BJ.Association analysis of endothelila nitric OX— ide synthase gene in essentila hypertension[J].Am J Hypertens, 2000,13(9):994—998. [2]Lefer AM.Nitric oxide nature S naturally occurring leukoeyle inhibitor [J].Circulation,1997,95(3):553—554. 『3] C01ombo MG,Paradossi U,Andreassi MG,et a1.Endothelila nitric OX— de synthase gene polymorphisms and risk of coronary disease[J].Clin Chem,2003,49(3):389—395. 临床和实验匡学杂志2010弃4月 第9卷第7期 ・501・ 宫颈上皮内瘤变203例处理方法探讨 张立杰杨琳刘妹(深圳市人民医院暨南大学附属二院妇科广东 深圳518020) 回顾 【摘要】 目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)的最好的处理方法,以达到减少漏诊、复发及过治的目的。方法DNA)检测、阴道镜检查结果及术后病理检查结果。结果性分析2008年3月至2009年6月在我院诊断为CIN的203例患者的宫颈细胞学涂片、高危型人乳头瘤病毒DNA(HPV —宫颈上皮内瘤变(HSIL)患者99%为高危型HPV DNA阳 性:阴道镜检查结果与活检病理比较,准确率为75%,经宫颈电环切除术(LEEP),术后病理阳性为病变期别减轻为154 例,相同的为48例,术后期别加重的为1例。结论宫颈治疗,疗效满意。 三阶梯检查方法可以较好地检出CIN患者,根据期别及生育要求对 【关键词】 宫颈上皮内瘤变高危型HPV—DNA宫颈电环切除术(LEEP) Study on treatment of230 cases with cervical intraepithelial neoplasia.ZHANG Li-fie,YANG Lin,LIUMei.The&partment ofgynecology, the Shenzhen People's Ho ̄ital and the Second Afilfiated Hospital ofJinan University,Shenzhen Guangdong 518020,China. 【Abstract】0bjective To study the best way for treatment of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)in order to achieve the purpose ofr reducing rates of missed diagnosis,relapse and over treatment.Methods The clinical data of 203 cases diagnosed as having CIN in patients with cervical cytological smears,high—risk HPV DNA detection,results of colposcopy and postoperative pathological examination during March 2008 to June 2009 in this hospital were retrospectively studied and analyzed.Results 99%of patients with cervical intraepithelial neoplasia(HSIL)were in high—risk with positive HPV—DNA as compared with findings of colposcopy and biopsy results.its accuracy rate was 75%.After loop electo-r surgical excision procedure(LEEP),the grade of pathological lesions was reduced in 154 cases and sanle in 48 eases,and deteriorated at postop— erative period in 1 case.Conclusion Three step inspection procedure can better detect patients with CIN,and treatment may he carried out as— cording to the grade of cervical lesions and demands on fertility,and the therapeutic effect is satisfactory. 【Key words】Cervical intraepithelila neoplasia;High—risk;HPV—DNA;Loop electrosurigcal excision procedure 近年来随着宫颈癌筛查的推广和开展,临床上宫颈 2.1 宫颈细胞学涂片与活检病理关系CIN患者宫颈细 上皮内瘤变(CIN)日益增多,CIN是宫颈浸润癌的癌前 胞学涂片正常的患者90例,CINI45例,CINⅡ20例,CINIII 病变,清除宫颈上皮内瘤变是防治宫颈癌重点。如何根 25例,细胞学的假阴性率为44%;不典型鳞状上皮细胞 据我们实际情况正确诊断、治疗及监测宫颈上皮内瘤 (ASCUS)58例(其中Asc—H 4例),CINI23例,CINII20 变,迄今仍是一个值得探讨的问题。 1资料与方法 例,CINm15例。见表1。 2.2高危型HPV—DNA和病理关系 宫颈上皮内瘤 本院妇科宫颈病门诊2008年3月至 变(HSIL)患者99%为高危型HPV DNA阳性。见表2。 表1 宫颈细胞学涂片与活检病理关系[例(%)] 1.1 一般资料2009年6月接诊的患者,阴道镜下活检查出CIN患者 203例,CIN I 86例,CINⅡ67例,CIN11160例,平均年龄 34.7(18~64岁),平均孕次3.27产次1.42次,无临床 症状116/203(57%),有阴道分泌物增多或接触性出 血,或不规则流血史87/203(43%)。 1.2诊断患者均行宫颈细胞学检查和高危型人类乳 表2高危型HPV—DNA与活检病理关系(例) 头状瘤病毒DNA(HPV—DNA)检查,其中任何一项筛 查阳性者行阴道镜检查,必要时阴道镜下取活检,病理 学诊断为最终的金标准。 2 结果 [4] 唐欧杉,徐耕,秦丰明,等.内皮型一氧化氮合酶基因多态性和早 tion of a common variant of the endothelial nitric oxide synthase gene 发冠心病的相关性研究[J].岭南心血管病杂志,2004,10(4):293 —(Glu298 Asp polymorphism)to the presence exlent and severity of coro— nary artery disease[J].Heart,2002,87(6):525—528. 296. [5] Wang CL,Hsu LA,Ko YS,et a1.Lack of association between the [7] Miyamoto Y,Saito Y,Kajiyama N,et a1.Endothelila nitirc oxide syn— Glu298Asp variant of the endothelial nitirc oxide synthase gene and ther. thase gene is positively associated with essentila hypertension[J].Hy— pertension,1998,32(1):3—8. isk of coronary artery disease among Taiwanese[J].J Formos Med As. SOC,2001,100(11):736—740. (收稿日期:2010一O1—17) [6] Colombo MG,Andreassi MG,Paradossi U,et a1.Evidence orf associa— 

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