18β-甘草次酸抑制人结肠癌HT29细胞增殖的研究

2024-07-29 作者:

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ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００８　ＶＯＬ．１９　ＮＯ．１　时珍国医国药２００８年第１９卷第１期　１　８　１３一甘草次酸抑制人结肠癌ＨＴ２９细胞增殖的研究　葛艳　，范钰　，李仪奎。　（１．河南省驻马店市第一人民医院４６３０００；　２．江苏大学附属医院，江苏镇江２１２００１；３．上海中医药大学科技实验中心，上海２０１２０３）　‘摘要：目的观察１８１３一甘草次酸（１８１３一ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＧＡ）对人结肠癌ＨＴ２９细胞增殖的影响，并从细胞周期及细胞　周期素依赖性激酶抑制蛋白（ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７）表达丰度探讨可能的机制。方法以不同浓度的ＧＡ作用结肠癌ＨＴ２９细胞　后，噻唑蓝比色法（Ｍ１丫ｒ）检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ分别检测细胞周期素依赖性激酶抑　制蛋白（ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７）变化。结果ＧＡ作用ＨＴ２９细胞后，增殖受到明显抑制。ＧＡ处理组细胞阻滞于Ｇ１／Ｓ期，并出现　ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７蛋白水平上调。结论ＧＡ可抑制人结肠癌细胞增殖，其机制与上调ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７蛋白有关。　关键词：１８１３一甘草次酸；结肠肿瘤；细胞周期；ｐ１６；ｐ２１；ｐ２７　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８—０８０５（２００８）０１－０１４３－０２　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　１　８　Ｂ—ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ　Ａｃｉｄ　ｏｎ　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｃｏｌｏｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ　Ｌｉｎｅ　ＨＴ２９　ＧＥ　Ｙａｎ　．ＦＡＮ　Ｙｕ“．Ｕ　Ｙｉ—ｋｕｉ　（１．Ｔｈｉｒｄ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｕｍａｄｉａｎ，Ｈｅｎａｎ　４６３０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ　２１２００１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎ。ａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０　１　２０３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１　８　３１一ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ　ａｃｉｄ（ＧＡ）ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＫＩｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＨＴ２９，ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ＧＡ　ｏｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｆｔｅｒ　ＨＴ２９　ｃｅｌｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖａｒｉｂｌｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＧＡ，ｗｅ　ｄｅｔｅｃｔｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　ＭＴＦ，ａｎｄ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，ａｎｄ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＣＫＩｓ（ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７）ｗｉｔｈ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＧＡ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＴ２９　ｃｅｌｌ，ａｎｄ　ｃａｕｓｅ　Ｇ１　ｐｈａｓｅ　ａｒｒｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｐ１６。ｐ２１　ａｎｄ　ｐ２７　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＧＡ　ｗｅｒｅ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｄｏｓｅ—ａｎｄ　ｔｉｍｅ—ｄｅ—　ｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＧＡ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＨＴ２９　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＫＩｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｐ１６，ｐ２１　ａｎｄ　ｐ２７．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：１８１３一ｇｌｙｃｙｒｈｅｔｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；Ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ；Ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＣＫＩｓ）；ｐ１６；　ｐ２１；ｐ２７　１８１３一甘草次酸（１８１３一ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＧＡ）是从中草药甘　１．２　ＭＴｒ法检测细胞增殖ＧＡ，购自Ｓｉｇｍａ公司。取对数生长　草中提取的有效成分。研究发现，ＧＡ对一些肿瘤细胞生长具有　期的ＨＴ２９细胞，调整细胞浓度为１　ｘ　１０　／ｍｌ，按每孔０．１　ｍｌ接种　一定的抑制作用　。但是其抗癌机制尚不完全清楚。Ｐ１６，　于９６孔细胞培养板中。无血清ＲＰＭＩ一１６４０同步化后，加入　ｐ２１，ｐ２７蛋白是细胞周期重要的调控因子，属于细胞周期素依赖　ＧＡ。设立空白对照组和不同ＧＡ作用浓度实验组，每组３复孔。　性激酶抑制蛋白（ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣＫＩｓ），对细　培养７２　ｈ后进行ＭＴｒ比色并绘制ＧＡ浓度与Ａ　。之间的关系曲　胞周期具有负调控作用　。在多种肿瘤细胞系和实体瘤中都不　线。细胞抑制率（％）：［（Ａ对　—Ａ实验）／（Ａ对　）］ｘ　１００％。　同程度地存在ＣＫＩｓ表达失活的情况　。笔者以人结肠癌细胞　１．３流式细胞仪检测细胞周期实验分组和ＧＡ处理同ＭＴｒ检　ＨＴ２９为模型，作用后，观察了ＧＡ对细胞增殖、细胞周期以及　测。收集ＧＡ不同作用浓度的细胞，用预冷的ＰＢＳ洗涤两次后加　ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７表达的变化情况，以探讨ＧＡ可能的作用机制。　入７０％乙醇１．０　ｍｌ固定细胞。上机前离心洗涤制成单细胞悬　１材料与方法　液，加ＰＩ（Ｓｉｇｍａ公司）染色，暗室放置，用流式细胞仪检测细胞周　１．１　材料人结肠癌细胞系ＨＴ２９购自中国科学院上海生物化　期分布。　学和细胞生物学研究所，在３７￣Ｃ，５％ＣＯ：培养箱中培养，培养液　１．４　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测ＣＫＩｓ（ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７）蛋白水平采用ｗｅｓｔ—　为含１０％小牛血清、１００　Ｕ／ｍｌ青霉素和１００　ｍｌ链霉素的ＲＰ—　ｅｌｎ　ｂｌｏｔ检测ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７蛋白水平，步骤参照文献　Ｊ。主要蛋　ＭＩ一１６４０（ＧＩＢＣＯ　ＢＲＬ）。　白抽提试剂ＮＰ一４０，ＰＭＳＦ，Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ购自上海Ｓａｎｇｏｎ公司，ＢＣＡ　蛋白分析试剂盒购自ＰＩＥＲＣＥ公司，鼠抗ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７的单克隆　收稿日期：２００７￣３—１８；修订日期：２００７￣６—１９　作者简介：葛艳（１９７１一），女（汉族），河南驻马店人，现任河南省驻马店　抗体购自Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司，内参照兔抗１３一ａｃｔｉｎ多克隆抗体购自　市第一人民医院主治医师，学士学位，主要从事消化系统疾病的研究　武汉博士德公司。分别收集ＧＡ不同作用浓度细胞的总蛋白，定　工作．　量后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ，检测ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７和内参照１３一ａｃｔｉｎ的蛋　通讯作者简介：范钰（１９７１一），男（汉族），辽宁建平人，现任江苏大学　白表达水平并进行比较。　附属医院副教授，副主任医师，硕士研究生导师，博士学位，主要从事胃肠　１．５统计学处理所有数据资料均经ＳＰＳＳＩＯ．０统计软件进行处　道肿瘤的基础与临床研究工作．　理。Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义，Ｐ＜０．Ｏ１为差异性显著。　・１４３・　维普资讯

时珍国医国药２００８年第１９卷第１期　２结果　ＩＪＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００８ＶＯＬ．１９　ＮＯ．１　制ＨＴ２９细胞增殖的同时也可使其细胞周期的分布发生明显变　进入ｓ期的细胞明显减少，且这种阻滞效应表现为一定程度上的　剂量依赖性关系。本研究提示，ＧＡ对结肠癌细胞ＨＴ２９的增殖　２．１　ＧＡ对结肠癌细胞增殖的影响ＭＩＴ分析显示，ＧＡ能抑制　化。ＧＡ作用４８　ｈ后，停滞于Ｇ。／Ｇ　期的细胞比例明显上升，而　ＨＩ２９细胞增殖，且呈剂量依赖性。结果见图１。　ｌ。。　抑制作用可能是由于ＧＡ改变了细胞周期的分布，使多数肿瘤细　胞停滞于细胞分化期即Ｇ　期，阻止细胞向ｓ期转化，从而减少了　ＤＮＡ合成和有丝分裂并促进其分化。　８。　一。　垂　。　２。　。　在此过程当中，ＣＫＩｓ在肿瘤分化中的的作用已引起人们的　注意。ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７是ＣＫＩｓ家族重要成员。其中ｐ１６属于ＩＮＫ　家族，能特异性地抑制ｃｙｌｃｌｉｎ　Ｄ／ＣＤＫ２和ｃｙｌｃｌｉｎ　Ｄ／ＣＤＫ４复合　物。而ｐ２１，ｐ２７都属于ｃｉｐ／Ｋｉｐ家族，能广泛抑制ｃｙｌｃｌｉｎ　Ｄ／ＣＤＫ　浓度／ｕ　ｍｏ１・Ｌ　图１　ＧＡ对人结肠癌细胞Ｈ１２９增殖的抑制作用　复合物的活性。它们可减弱ｃｙｌｃｌｉｎ　Ｄ／ＣＤＫ复合物对Ｒｂ蛋白的　磷酸化作用，使细胞发生Ｇ　一Ｓ期阻滞，从而对细胞周期发挥负　２．２　ＧＡ对Ｈ＇１２９细胞周期的影响ＧＡ作用４８　ｈ后，各个ＧＡ浓　调控作用　’　Ｊ。在多种肿瘤细胞系和实体瘤中都不同程度地存　ｓ表达失活的情况　ｊ。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ显示，人结肠癌细胞系　度作用组Ｇ　期细胞均明显多于空白对照组，而ｓ期、Ｍ期细胞则　在ＣＫＩ相应减少。各ＧＡ剂量组之间差异性具有统计学意义（Ｐ＜　ＨＴ２９中３种ＣＫＩｓ蛋白ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７都有表达。进一步发现，ＧＡ　０．０５）。见表１。提示ＧＡ能引起ＨＴ２９细胞周期发生Ｇｏ／Ｇ　期　对ｐ１６，ｐ２１和ｐ２７表达均有不同程度的促进作用。其中ＧＡ对　［　｝　［　阻滞。　表１　ＧＡ对人结肠癌细胞ＨＴ２９细胞周期的影响　％　ｐ２１和ｐ２７表达促进作用较明显，且这种诱导作用呈剂量依赖性　］　］　］　］　］　１　２　３　４　５　效应；对ｐ１６蛋白促进作用稍弱，但也呈剂量依赖性效应。　总之，本研究提示，ＧＡ可抑制癌细胞的恶性增殖，其机制可　能与上调ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７的表达有关。　参考文献：　Ｋｅｌｌｏｆｆ　ＧＪ，Ｂｏｏｎｅ　ＣＷ，Ｓｔｅｅｌｅ　ＶＥ，ｅｔ　ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　与对照组比较，　Ｐ＜０．０５；一Ｐ＜０．０１　ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｄｒｕｇ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｕｐｐ１），１９９４，　２０：１．　２．３　ＧＡ对ｃＫｂ（ｐ１６，ｐ２ｌ，ｐ２７）蛋白水平的影响Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检　测发现，与空白对照组相比，ＧＡ处理组ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７的积分光度　Ｒｕｉ　Ｈ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　值均有较明显的上升，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。提示　ＧＡ能上调ＨＴ２９细胞中ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７蛋白的表达。结果见表２。　表２　ＧＡ对ＨＴ２９细胞ＣＫＩｓ（ｐ１６，ｐ２１。ｐ２７）蛋白　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｓｕｐｐｌ，１９９７，２７：７．　Ｐｅｔｅｒ　Ｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＣＫＩｓ）　［Ｊ］．Ｐｒｏｇ　Ｃｅｌｌ　Ｃｙｃｌｅ　Ｒｅｓ，１９９７，３：９９．　Ｇｒａｎａ　Ｘ，Ｒｅｄｄｙ　ＥＰ．Ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｉｎ　ｃｅｌｌａｓ：ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｃｙ－　表达的影响（ｐ１６。２１。２７／１３一ａｃｔｉｎ）（ｉ±　）　ｃｌｉｎｓ，ｃｙｃｌｉｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅｓ（ＣＤＫｓ），ｇｒｏｗｔｈ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　型鎏鏖　对照　ＧＡ低浓度　ＧＡ中浓度　型：　：！　一１２．５　２５　！　！　！　０．１７３±０．０２５　０．２５８±０．０３２・　０．３８１±０．０３６・　ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＣＫＩｓ）［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９５，１１　（２）：２１１．　Ｆａｎ　Ｙ，Ｚｈｅｎｇ　Ｓ，Ｘｕ　ＺＦ，Ｄｉｎｇ　ＪＹ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｐｏｌｏ—　ｌｉｋｅ　ｋｉｎａｓｅ一１　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ　ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｏｆ　ｃｏｌｏｎ　０．０３５　Ｓ０．００９　０．１８５±０．０２１　０．１２９　ｓ０．０２６　０．２８９±０．０２５　０．２３６　ｓ０．０３５　０．４３５±０．０３９‘坠直鎏廑　：箜　Ｑ：　Ｑ：　Ｑ：　§：：Ｑ：　塑　Ｑ：Ｑ　：　与对照组比较，　ｐ＜Ｏ．０５；一ｐ＜Ｏ．Ｏｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ＳＷ４８０［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｕｒｌ，２００５，１１　（２９）：４５９６．　Ｍｅｈｔａ　Ｋ，Ｍｃｑｕｅｅｎ　Ｔ，Ｎｅａｍａｔｉ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎｏｉｄ　ｒｅｅｅｐ－　ｔｏｒｓ　ＲＡＲａａｎｄ　ＲＸＲａ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ－　３讨论　本研究采用不同浓度的ＧＡ处理结肠癌ＨＴ２９细胞，于不同　时间收集细胞，探讨了细胞增殖、细胞周期以及ＣＫＩｓ重要成员　ｐ１６，ｐ２１，ｐ２７表达。　ｌｙ，ｉｎ　Ｈｅｌａ６０　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｄｉｆｅｒ，１９９６，７（２）：１７９．　Ｓｈａｏ　ＺＭ，Ｄａｗｓｏｎ　ＭＩ，Ｌｉ　ＸＳ，ｅｔ　ａ１．Ｐ５３　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ｃ，Ｏ／Ｇ１　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｒｅｔｉｎｏｉｄ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ＭＩＴ结果发现，ＧＡ可明显抑制ＨＴ２９细胞生长，并且这种增　殖抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性效应，证实ＧＡ对结肠癌　细胞生长有负调控作用。　［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９５，１１（１１）：４９３．　Ｓｈｅｒｒ　ＣＪ．Ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅｓ［Ｊ］，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，２７４（５２９３）：１６７２．　Ｏｈｔａｎｉ　Ｍ，Ｉｓｏｚａｋｉ　Ｈ，Ｆｕｊｉｉ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｐａｃｔ　ｏｆｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｃｌｉｎ　—细胞周期失控与肿瘤细胞分化有关。细胞分化的主要标志　是合成特异性的功能蛋白，出现细胞类型的功能性改变，同时进　行细胞表型的形态结构变化。这些标志性变化均在Ｇ　期及细胞　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｐ２７Ｋｉｐｌ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｏｖｅｒａｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｈ　ｎｏｎ—ｅａｒｔｌｙ　ｓｔａｇｅ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　分化期完成。肿瘤细胞去分化的一个重要特征就是Ｇ，一Ｓ期卡　点失常，进入ｓ期的细胞异常增多　’　。因此，Ｇ　期阻滞可看作　细胞分化的一个判断指标。流式细胞仪检测结果发现，在ＧＡ抑　［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，１９９９，８５（８）：１７１１．　Ｃｏｒｄｏｎ—Ｃａｒｄｏ　Ｃ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｈｕｍａｎ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ。１９９５，１４７　（３）：５４５．　・１４４・