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2024年5月30日发(作者：)

双荧光素酶报告原理

双荧光素酶报告原理是一种常用的基因表达分析方法，其适用

于实时监测和定量分析基因的转录水平。该方法利用双荧光素

酶（Dual-Luciferase）报告基因系统，通过测量荧光信号的强

度来反映目标基因的表达情况。

该系统通常由两种荧光素酶组成，一种是火萤酶（Firefly

luciferase），另一种是海洋荧光素酶（Renilla luciferase）。实

验中，将目标基因的启动子区域与火萤酶基因或海洋荧光素酶

基因连接，然后转染到细胞中。当目标基因的转录水平发生变

化时，火萤酶或海洋荧光素酶基因也会受到影响。因此，通过

检测这两种荧光素酶的活性，可以间接反映出目标基因的表达

水平。

在双荧光素酶报告系统中，实验通常分为两个步骤。首先，加

入火萤酶底物（如D-luciferin），使火萤酶在酶催化下产生荧

光信号。然后，加入终止剂，使火萤酶反应停止，并加入海洋

荧光素酶底物（如coelenterazine），使海洋荧光素酶产生荧

光信号。通过荧光检测仪测量这两种荧光素酶的信号强度，可

以定量分析目标基因的表达水平。

值得注意的是，在实验设计中，常常会加入内参基因（如β-

actin），用以校正实验中的差异。内参基因是一个稳定表达的

基因，在实验中其转录水平不受处理的影响，可以作为表达平

衡的参考。通过将内参基因与目标基因共转染到细胞中，可以

通过内参基因的表达水平来校正目标基因的表达水平，提高实

验结果的准确性。

总的来说，双荧光素酶报告原理是通过测量火萤酶和海洋荧光

素酶的活性来间接反映目标基因的转录水平。该方法简单、灵

敏、可定量，广泛应用于基因表达研究和高通量筛选等领域。

本文标签： 基因荧光素酶目标表达水平

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