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2024年6月19日发(作者:)
组建克隆重叠群的主要方法
组建克隆重叠群的主要方法包括以下几种:
1、限制性酶切位点DNA指纹法。首先对随机克隆的DNA选定
一个或多个稀有碱基识别位点的限制性内切酶消化,每个克隆都会被
酶切形成不同的指纹,然后用放射性同位素进行末端标记,用序列分
析胶分离这些片段,最后经放射性自显影检测。这些指纹图谱数据经
计算机处理后,根据片段的相似性,构建重叠克隆群。
2、鸟枪法(shotgun)。该法是原核生物基因组组装的标准方法,
原理是利用打断为小片段的DNA之间所拥有的重叠部分进行测序后
组装。文库包含序列具有随机性。
3、克隆重叠群法(clone contig method)。该法先将原DNA打
断成较大片段,构建克隆重叠群,并结合分子标记定位到染色体上。
对于大片段克隆,均可利用鸟枪法进行测序。该方法要求文库先构建
重叠群大分子文库,待逐一测序时再构建随机序列文库。
4、染色体步移法(Chromosomal walking)。通过文库中已选择
的克隆,根据其设计探针,筛选与其重叠的克隆,进而以此类推,将
克隆群延长。
5、指纹图谱分析法(fingerprinting)。通过多个限制性内切酶对
克隆进行酶切,以分析酶切结果。技术手段如上文提到的限制性作图,
通过酶切条带或末端信号,以确定克隆的重叠。
总的来说,以上方法各有特点,根据实际需求和实验条件选择合
适的方法是关键。
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