基于HOTAIR高表达的U87细胞的恶性增殖以及与干扰素的相关性研究_百度文

2024-07-29 作者:

浙江中医药大学学报２０１６年ｌｏ月第４ｏ卷第ｌ０期　基于ＨＯＴＡＩＲ高表达的Ｕ８７细胞的恶性增殖　以及与干扰素的相关性研究　余超超李婷马鑫范春雷田男　浙江中医药大学生命科学学院杭州　３１００５３　摘要：【目的】研究干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）、ＨＯＸ基因反义转录ＲＮＡ（ＨＯＸ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ，Ｈ０ＴＡＩＲ）和恶性胶质瘤的关系，探索恶性胶　质瘤发生发展的分子机制。【方法】从ＮＣＢＩ网站的基因表达数据库下载ＧＳＥ４２９０数据集分析ＨＯＴＡＩＲ在肿瘤组织和正常组织中的表达差异；使用　ｑＲＴ—ＰＣＲ分析ＨＯＴＡＩＲ在人脑胶质瘤细胞Ｕ８７和人星形胶质细胞ＨＡ１８００中表达差异；使用Ｍ１ｒｒ法和流式细胞术检测ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７细　胞增殖和周期的影响；使用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测干扰素ｄ、ｐ和　干预Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ基因的表达情况。【结果】肿瘤组织中ＨＯＴＡＩＲ表达量明显高　于正常组织，Ｕ８７细胞中的ＨＯＴＡＩＲ表达量显著高于ＨＡ１８００，抑制ＨＯＴＡＩＲ高表达可降低Ｕ８７细胞的增殖率并且可增加细胞周期的阻滞，ＩＦＮ—Ｂ　和ＩＦＮ一＾ｖ干预Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ的表达量差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；ＩＦＮ—ａ干预Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ的表达量增加，干预时间越长、浓度越　高表达量增加越显著，差异有统计学意义（Ｐ　０．０５，Ｐ＜０．０１）。『结论】Ｈ０ＴＡＩＲ在Ｕ８７细胞中异常表达可能对胶质瘤发生发展具有促进作用，ＩＦＮ—ｄ能　够上调ＨＯＴＡＩＲ的表达。参与胶质瘤的发生发展。　关键词：ＨＯＴＡＩＲ；胶质瘤；ＩＦＮ；ｌｎｃＲＮＡ；细胞周期　中图分类号：１０３１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５－５５０９（２０１６）１０－０７１５－０８　ＤｏＩ：１０．１６４６６／ｊ．ｉｓｓｎ１００５－５５０９．２０１６．１Ｏ．００１　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　Ｈ０ＴＡＩＲ　Ｈｉｇｈ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｕ８７　Ｃｅｌｌ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　Ｐｒｏｌｆｅｒａｔｉｉｏｎ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｙｕ　Ｃｈａｏｃｈａ￣Ｌｉ　Ｔｉｎ　Ｍａ　Ｘｉｎ，ｅｔ　ａｌ　Ｃｏｌ—　ｌｅｇｅ　ｏｆＬ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ（３１００５３．１Ｃｈｉｎａ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏ：ｉｅｃｔｉｖｅ］Ｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＨＯＴＡＩＲ（ＨＯＸ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ）ａｎｄ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｇｌｉｏｍａ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．ｒＭｅｔｈｏｄｓ］Ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｎｄ　ｎｏｒｍａｌａ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｙ　ＧＳＥ４２９０　ｄａｔａｓｅｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｄｏｗｎｌｏａｄｅｄ　ｆｒｏｍ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄａｔａｂａｓｅ　ｆｒｏｍ　ＮＣＢ１　ｗｅｂｓｉｔｅ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｉｎ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｉｌｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｌｉｌ　ｃｅｌａｌｓ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｔｅｓｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｕ８７　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｔｈａｔ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｉＨ０ＴＡＩＲ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｙｃｌｅ　ｂｙ　ＭＴＦ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ＨＯＴＡＩＲ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｕ８７　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａｌｐｈａ１　ｂｅｔａ　ｏｒ　ｇａｍｍａ　ｖｉａ　ＲＴ－ＰＣＲ．ＩＳｅｓｕｌｔ￣Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅ．ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ＨＯＴＡＩＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎ　ＨＯＴＡＩＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｕ８７　ｃｅｌＩｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｂｅｔａ　ｏｒ　ｇａｍｍａ（Ｐ＞Ｏ．０５）；ｂｕｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ａｌｐｈａ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｉｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗａｓ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｌｏｎｇｅｒ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｎｅｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｐ＜Ｏ．０５，Ｐ＜０．０１）．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ａｌｔｅｒｅｄ　ＨＯＴＡＩＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｍａｙ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｇｌｉｏｍａ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ　ａｌｐｈａ　ｍｉｇｈｔ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｌｉｏｍａ　ｔｈｏｕｇｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＨＯＴＡＩＲ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＯＴＡＩＲ；ｇｌｉｏｍａ；ＩＦＮ；ｌｎｃＲＮＡ；ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　人脑恶性胶质瘤（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）是中枢神经系统　肿瘤　。干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）是一种前炎症因子，大　中最常见的原发性恶性肿瘤，其发生率占颅内肿瘤的　５０％～６０％ｔ”。它增殖快，侵袭性强，能迅速侵犯周围正　量研究表明其参与了一些与肿瘤发生相关的慢性炎　症的发生发展从而抑制肿瘤［５－７－］。但也有研究报道ＩＦＮ　也充当促肿瘤因子，过高的ＩＦＮ水平能够促进肿瘤　的进展，甚至影响其在体内的转移潜能　埘。　伴随着人类基因组测序计划的实施，研究者发现　长链非编码ＲＮＡ（１ｏｎｇ　ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ，ｌｎｃＲＮＡ）因参　常的脑组织，且对放化疗不敏感，患者平均生存期不　足一年［１］。胶质瘤致病机制复杂，至今尚无定论。　近年来，炎症与肿瘤的关系受到了越来越多的关　注。慢性炎症在进展过程中可促使正常细胞发生　ＤＮＡ损伤、原癌基因突变、基因组不稳定，从而诱发　与ｘ染色体沉默、基因组印记、染色质修饰、转录激　基金项目：浙江省科技厅分析测试科技计划项目（２０１５Ｃ３７０１２）；高等学校博士学科点专项科研基金（２０１３３３２２１２０００２）；浙　江省医药卫生科技计划（２０１４ＫＹＡ１５０）　Ｆｕｎｄ　ｐｒｏｊｅｃｔｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｅｓｔ　ｐｒｏｊｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　ＰｍＶｉｎｃｅ（２Ｏ１５Ｃ３７０１２）；　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｄｏｃｔｏｒａｌ　Ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｃｏｌｌｅｇｅｓ　ａｎｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（２０１３３３２２１２０００２）；Ｐｌａｎ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１４ＫＹＡ１５０）　通讯作者：田男．Ｅ—ｍａｉｌ：ｔｉａｎｎａｎｌｕｘ＠１２６．ｃｏｒｎ　７１５　泠甜尉．嘏一噼　０．ｒＡＩ　尉卅＝达嚣ＩＪ∞．７耸裔嚣崇薛遗　及　洋　墨盖　霹　斟　浙江中医药大学学报２０１６年ｊＯ月第４Ｄ卷第ｊ０期　活、转录干扰以及核内运输等重要的调控过程而参　与各种疾病的发生发展ＩＩ１】。有研究报道，ｌｎｃＲＮＡ在　免疫炎症反应的过程中发挥重要作用，可以通过直　接作用于炎症因子的表达，控制炎症反应ｌｌ２］。ＨＯＸ基　因反义转录ＲＮＡ（ＨＯＸ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ　ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　１．３实验方法　１．３．１细胞培养Ｕ８７细胞培养于含１０％灭活胎牛　血清、１　ｘｌＯｓＵ・Ｌ　青霉素和１００ｍｇ・Ｌ　链霉素的　ＤＭＥＭ完全培养基中，置３７￣Ｃ、５％ＣＯ：饱和湿度培养　箱内培养。细胞经培养传代，取对数生长期细胞进行　实验。　１．３．２　ＧＥＯ数据库资料收集及分析从ＮＣＢＩ网站　ＲＮＡ，ＨＯＴＡＩＲ）是由Ｒｉｎｎ课题组于２００７年报道的首　个具有反式作用的ｌｎｃＲＮＡｔ　５１，表达水平与胶质瘤的　发生发展、转移及预后密切相关［１６－１８１。　的基因表达数据库（ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｍｎｉｂｕｓ，ＧＥＯ）　中（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｏ）下载ＧＳＥ４２９０数　为了探索ＩＦＮ、ｌｎｃＲＮＡ　ＨＯＴＡＩＲ和恶性胶质瘤　的关系，深人研究恶性胶质瘤发生发展的分子机制，　本研究将从以下３个方面进行初步探索：首先　ＨＯＴＡＩＲ在胶质瘤细胞及正常胶质细胞中表达差异，　据集，对各数据集中胶质瘤患者肿瘤组织和癌旁正常　组织芯片数据进行配对比较。ＧＳＥ４２９０数据集使用　ＧＰＬ５７０［ＨＧ－Ｕ１３３　Ｐ１ＵＳ—　２］Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｏｍｅ　其次ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７胶质瘤细胞增殖和周期　的影响，最后ＩＦＮ—Ｏｔ、ｐ和＾ｙ干预胶质瘤Ｕ８７细胞后　ＨＯＴＡＩＲ基因的表达情况。　１材料和方法　Ｕ１３３　Ｐｌｕｓ　２．０　Ａｒｒａｙ　片检测基因转录组表达，包　括１５７例肿瘤组织（２６例星形胶质细胞瘤，５０例少突　胶质细胞瘤，８ｌ例胶质母细胞瘤）和２３例正常组织　样本，分析肿瘤组织中ＨＯＴＡＩＲ基因表达水平。使用　人脑胶质瘤细胞Ｕ８７和人星形胶　１．１细胞与试剂ＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ　６软件进行作图及统计学处理。根　质细胞ＨＡｌ８００均购自中科院上海细胞所。ＤＭＥＭ高　据不同数据集纳入的样本性质不同，癌与癌旁／正常　组织的数据比较采用配对或非配对ｔ检验。以Ｐ＜Ｏ．０５　为有差异有统计学意义。　１．３．３　ＩＦＮ处理组别设置Ｕ８７细胞分别进行１ＦＮ—　Ｏｔ、Ｂ、＾ｙ干预处理。设置６ｈ、１２ｈ和２４ｈ　３个ＩＦＮ干预　糖培养基（批号：２０１５０６０１０１）、无支原体胎牛血清（批　号：２０ｌ５０５ｌ８）以及含ＥＤＴＡ的０．２５％胰蛋白酶（批号：　２０１５０７０１）购于南京凯基生物科技发展有限公司。　Ｔｒｉｚｏｌ试剂（批号：５０１７５１１１）为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产　品。ＨｉＦｉ　ＭＭＬＶ　ｃＤＮＡ第一链合成试剂盒（批号：　００２５１５１２）、Ｕｌｔｒａ　ＳＹＢＲ荧光定量ＰＣＲ试剂盒（批号：　３０１１２）为北京康为世纪生物科技有限公司产品。　ＨｕＳＴＡＴ１、ＨｕＨＯＴＡＩＲ、Ｈｎｐ—ａｃｔｉｎ引物由上海生物工　时间组别，设置ＩＦＮ浓度组为：空白组，ＩＦＮ浓度　１０ｎｇ・ｍＬ～、２０ｎｇ・ｍＬ～、４０ｎｇ・ｍＬ～、８０ｎｇ・ｍＬ　组．共５　个组别。在Ｕ８７细胞中分别加入ＩＦＮ一０【、１３、＾ｙ，加入浓　度为０ｒｉｇ’ｍＬ～、１０ｎｇ‘ｍＬ～、２０ｎｇ’ｍＬ～、４０ｎｇ。ｍＬ一、　８０ｎｇ・ｍＬ　５个浓度梯度，在ＩＦＮ一　、ｐ、　干预６ｈ、１２ｈ　和２４ｈ后分别收集细胞，提取ＲＮＡ，进行ｑＲＴ—ＰＣＲ　检测。　程有限公司合成。ＩＦＮ一　（批号：０９０ＣＹ２８）、ＩＦＮ—Ｂ（批　号：０２１１Ｓ４５８）、ＩＦＮ　（批号：０８１４２７）购自美国ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ　公司（中国代表处）。ｓｉＨＯＴＡＩＲ、ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ由百　奥迈科生物技术有限公司合成。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００　（批号：１２４３６４９）购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＭＴＹ（批　号：０７９３）购自Ａｍｅｒｅｓｃｏ公司，ＤＭＳＯ（批号：ＷＸＢＢ８０７９Ｖ）　１．３．４　ｑＲＴ—ＰＣＲ检测　收集Ｕ８７细胞沉淀，用Ｔｒｉｚｏｌ　试剂提取细胞总ＲＮＡ后，分别取ＲＮＡ进行反转录，　购自Ｓｉｇｍａ—Ｖｅｔｅｃ。细胞周期ＤＮＡ含量检测试剂盒　（ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｋｉｔ）（批号：１２７４２７６）购自江苏　反转录使用ＨｉＦｉ　ＭＭＬＶ　ｃＤＮＡ第一链合成试剂盒，　反应体系２０１￣Ｌ，４２￣Ｃ反应５０ｍｉｎ，７０％１５ｒａｉｎ，冰上放　置５ｍｉｎ后，一２０￣Ｃ保存。取１ｔｘＬ反转录产物进行　ｑＲＴ—ＰＣＲ反应，反应使用Ｕｌｔｒａ　ＳＹＢＲ荧光定量ＰＣＲ　试剂盒，扩增条件：９５℃预变性１０ｍｉｎ，然后每个循环　凯基生物技术股份有限公司。　１．２仪器Ｇｕａｖａ　ＥａｓｙＣｙｔｅ　８微流式细胞分析仪　（美国ＥＭＤ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）；ＸＤＳ一１倒置显微镜（重　９５￣Ｃ变性３０ｓ，５８％退火３０ｓ，７２℃延伸３０ｓ；共４０个循　环，最后７２％延伸１０ｍｉｎ。使用比较ＣＴ值法分别计算　样本中的基因表达水平，计算公式如下：ＡＣｔ＝Ｃｔ目的基　］［－Ｃｔ内参基因，△ＡＣｔ＝△Ｃｔ实验组一△Ｃｔ对照组，相对表达　庆光学仪器厂）；ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ　Ｍ３多功能酶标仪（日本　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ公司）；Ｓｔｅｐ　Ｏｎｅ　Ｐｌｕｓ　Ｒｅａｌ—Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｓｙｓｔｅｍ荧光定量ＰＣＲ仪（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公　司）　量＝２。＾舳。使用的内参及目的基因引物序列，见表１。　７１６　浙江中医药大学学报２０１６年ｌｏ月第４ｏ卷第１ｏ期　表１　ｓｉＨＯＴＡＩＲ、Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ、ＨｕＳＴＡＴ１、Ｈｕｌ３一ａｃｔｉｎ和ＨｕＨＯＴＡＩＲ的基因序列　Ｔａｂ．１　Ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｓｉＨＯＴＡＩＲ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ＨｕＳＴＡＴ１，Ｈｕｌ３－ａｃｔｉｎ　ａｎｄ　ＨｕＨＯＴＡＩＲ　１．３．５　ＭＴＦ法检测胶质瘤细胞增殖率本研究利用　固定过夜。４５０ｒｐｍ，离心５ｍｉｎ，弃上清。加人５００￣Ｌ含ｌ　ＭＴＴ分析法比较了转染后各组细胞增殖率的变化情　况。设置空白组、阴性对照组，０ｈ、２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ　４　个时间点组，计算增殖率后绘制柱状图。取瞬时转染　ｓｉＨＯＴＡＩＲ或ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ的Ｕ８７细胞，以５—７×　１０　个／孔密度传代培养于９６孔板，每孔１００１ｘＬ细胞　悬液，每组设６个复孑Ｌ，同时设置调零孔（培养基、　ｌｍｇ・ｍＬ　ＲＮａｓｅＡ的ＰＢＳ缓冲液重悬细胞，加入５　Ｌ　Ｉ　ＰＩ染料避光孵育５～１５ｍｉｎ，过２００目细胞筛后，Ｇｕａｖａ　１　ｅａｓｙＣｙｔｅ　８微流式细胞分析仪检测细胞周期。　ｌ　１．３．７统计学方法用ＳＰＳＳ　１３．０软件对实验数据Ｉ　进行统计学分析，实验结果数据以ｘ＋ｓ表示。组问比｛　较采用单因素方差分析（ｏｎｅ—ｗａｙ—ＡＮＯＶＡ），多个样ｌ§　０５为差异有ｌ舅　Ｍ１Ｔｒ、ＤＭＳＯ），置３７ｏＣ，５％Ｃ０：中培养。空白组、阴性　本均数间每两样本比较采用ｔ检验。Ｐ＜０．对照组以及实验组均于培养０、２４、４８、７２ｈ时，分别吸　去培养液，每孔加入５ｍｇ・ｍＬ　的ＭＴＴ溶液１０１￣Ｌ，振　荡摇匀后避光培养４～６ｈ。小心弃去上清后，每孔加入　１５０１ｘＬ　ＤＭＳＯ，震荡溶解５～１０ｍｉｎ，结晶完全溶解后，　于波长４９０ｎｍ测ＯＤ值。细胞增殖率＝处理组ＯＤ值／　对照组ＯＤ值。　统计学意义。　ｌ渐　　ｌ２结果　２．１　ＨＯＴＡＩＲ在胶质瘤细胞及正常胶质细胞中表达差异对ＮＣＢＩ网站上ＧＳＥ４２９０数据集进行分析，结果显示高级别胶质瘤组织中ＨＯＴＡＩＲ的表达量高于低级别胶质瘤，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；高级别｛譬　ｌ驾　Ｉ善　ｌ　ｌ箍　胶质瘤组织和低级别胶质瘤组织中ＨＯＴＡＩＲ表达量ｌ　瞬时转染ｓｉＨＯＴＡＩＲ或ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ的Ｕ８７细胞，　均高于相匹配的正常脑组织，差异有统计学意义（Ｐ＜ｌ　以ｌ～２ｘ１０　个／ｍＬ密度接种于６孔板，置３７￣Ｃ，５％　０．０１）（图１）。ｑＲＴ—ＰＣＲ检测结果显示，胶质瘤细胞Ｉ　ＣＯ：中培养。分别于转染后２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ，用不含　Ｕ８７中ＨＯＴＡＩＲ表达较正常星形胶质细胞ＨＡｌ８００　Ｉ暑　１．３．６　Ｇｕａｖａ微流式细胞分析仪检测细胞周期　取　ＥＤＴＡ的胰蛋白酶消化细胞１～２ｒａｉｎ，收集细胞，倒去　滴加入装有３ｍＬ　７０％预冷乙醇的试管中。一２０℃冰箱　增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．００１）（图２）。总体分ｌ　上清。用ｌｍＬ预冷的ＰＢＳ充分混匀细胞沉淀颗粒，逐　析，ＨＯＴＡＩＲ基因在胶质瘤组织中异常高表达。　ｌ　２．２　ＭＴｒ法检测ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７胶质瘤细胞１　图１　ＧＳＥ４２９０中ＨＯＴＡＩＲ胶质瘤组织和癌旁组织中表达差异分析　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｗｅｒｅ　ａｎａ｜ｙｚｅｄ　ｉｎ　ｇ］ｉｏｍａ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＮＣＢＩ’ｓ　ＧＥＯ　ｄａｔａｓｅｔｓ　ＧＳＥ４２９０　注：ＮＢＴ：正常脑组织，ＬＧＧ：低级别胶质瘤，ＨＧＧ：高级别胶　质瘤。　Ｎｏｔｅ：ＮＢＴ：ｎｏｒｍａｌ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ，ＬＧＧ：ｌｏｗ　ｇｒａｄｅ　ｇ］ｉｏｍａ，ＨＧＧ：　ｈｉｇｈ　ｇｒａｄｅ　ｇｌｉｏｍａ．　ＮＢＴ　ＬＧＧ　ＧＳＥ４２９０　ＨＧＧ　７１７　醚融．嘏一瞬　｝１０，ｒＡｌ　斟姗　墨　∞　瞥高墨　遗　及＿与　潜　嚣盏　痒　浙江中医药大学学报２０１６年ｊＤ月第４０卷第Ｊ０期　３．５　３．０　一　一口０Ｉｓ砷　２　２　∞　ｚ　吕　Ｈ《　０墨　１　１　Ｏ　５　０　５　Ｏ　５　Ｏ　图２胶质瘤细胞中ＨＯＴＡＩＲ的表达量　Ｆｉｇ．２　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　ＮＨＡｓ　增殖的影响与空白组、阴性对照组比，除０ｈ外，其　有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５，Ｐ＜０．０１）。见图３。　他时间点ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染组细胞增殖率均降低，差异　２．３流式细胞仪检测ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７胶质瘤　０　２４　４８　７２　Ｔｉｍｅ（ｈ）　口　。　忍　ＮＣ　豳ｓｉＨ０ＴＡＩＲ　图３　ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７胶质瘤细胞增殖的影响　Ｆｉｇ．３　ＭＴＦ　ａｓｓａｙ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｉＨＯＴＡＩＲ　ｏｎ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌｓ　注：ｃｏｎ：空白组；ＮＣ：阴性对照组。与ｃｏｎ组比较，　，０．０５，　ｐ，０．０１；与ＮＣ组比较，ａｐ＜ｏ．０５，　Ａｐ＜０．０１。　Ｎｏｔｅ：ｃｏｎ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；ＮＣ：ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎ　ｇｒｏｕｐ，　／）＜０．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１，ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＮＣ　ｇｒｏｕｐ，Ａｐ＜ｏ￣５，　ＡＰ＜ＯＯ１　．细胞周期的影响ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染Ｕ８７细胞，２４ｈ、　抑制ＨＯＴＡＩＲ异常表达诱导的细胞增殖，显著增加　细胞周期的阻滞。　２．４　ＩＦＮ干预Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ基因的表达情况　实验结果表明，ＩＦＮ一仅干预Ｕ８７细胞后，ＩＦＮ组的　４８ｈ及７２ｈ处理细胞，ＰＩ染色，Ｇｕａｖａ微流式细胞分　析仪检测各组细胞周期阻滞情况。结果表明，转染后　随着时间的延长，胶质瘤细胞Ｇ０／Ｇ１期细胞逐渐增　加，Ｓ期相对减少（图４）。这一结果与细胞增殖试验　相吻合，进一步证明胶质瘤细胞转染ｓｉＨＯＴＡＩＲ能够　ＨＯＴＡＩＲ表达量较空白组增加，且随着ＩＦＮ—　干预　浓度和干预时间的增加，ＨＯＴＡＩＲ的表达量随之增　７１８　浙江中医药大学学报２０１６年１Ｏ月第４ｏ卷第１ｏ期　ｓｉＨＯＴＡＩＲ　ｎｏｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ＧＯ　Ｇ１　８　ｎ　８　昌　０　Ｏ　１０００　２０００　３０００　４０００　５０００　０　ｌｏ０Ｏ　２Ｏｏｏ　３ｏｏ０　４０００　５ｏｏＯ　ＤＮＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　０　１ｏｏＯ　２０ｏＯ　３Ｏ０ｏ　４０ｏＯ　５０ｏ０　ＤＮＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ＤＮＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　∞　舳　∞　∞　加　＝　．宴　芎　０　０　０　叠Ｇ２　Ｓ　ａ　ＧＯ　Ｇ１　０　１０００　２０００　３０００　４０００　５００Ｈ０　ＤＮＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　图４　ｓｉＨＯＴＡＩＲ转染对Ｕ８７胶质瘤细胞周期的影响　Ｆｉｇ．４　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｉＨＯＴＡＩＲ　ｏｎ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌｓ　加，差异均有统计学意义（尸＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。ＩＦＮ—Ｂ和　ＩＦＮ一　干预Ｕ８７细胞后，ＩＦＮ组的ＨＯＴＡＩＲ表达量与　空白组比较差异无统计学意义（尸＞０．０５）。见图５～７。　果一致。初步证实ＨＯＴＡＩＲ表达水平与胶质瘤的密　切相关性。Ｍ１Ｔｒ及流式细胞术结果表明，抑制ＨＯ—　ＴＡＩＲ高表达而降低胶质瘤细胞的增殖率，抑制ＨＯ—　ＴＡＩＲ异常表达诱导的细胞增殖，显著增加细胞周期　的阻滞。进一步揭示ＨＯＴＡＩＲ对胶质瘤发生发展的　召ｃ　拦瓷歪柞帚　山　缸　本研究把ＳＴＡＴ１作为阳性对照，ＩＦＮ一仅、ＩＦＮ一８　和ＩＦＮ一　干预Ｕ８７细胞后，６ｈ、１２ｈ、２４ｈ时ＳＴＡＴ１表　的增加ＳＴＡＴ１表达量增加，差异均有统计学意义（尸＜　０．０１）。发现ＩＦＮ一　干预Ｕ８７细胞后各时间组的　ＨＯＴＡＩＲ表达水平的变化倍数与ＳＴＡＴ１表达水平的　变化倍数相比较不显著　０．０５）。见图５～７。　３讨论　融鹾．，寺¨蝴斗ＺＳ．ＡＪ皋勘娜　达量高于空白组，且随着ＩＦＮ干预浓度和干预时间　调控作用。　大部分观点认为ＩＦＮ能够通过抑制肿瘤细胞增　殖和癌基因的表达、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新　生血管形成及肿瘤转移发挥其抗肿瘤作用，但也有　研究发现ＩＦＮ对肿瘤具有促进增殖的作用。ＭｃＭｉｌｌａｎ　等人最先报道ＩＦＮ一＾ｙ预处理的瘤细胞经静脉注射后　引起的实验性肺转移，转移结节数比注射未处理的　瘤细胞明显增多，促进了肿瘤发展嘲。过高的ＩＦＮ水　ＧＥＯ数据库中胶质瘤组织ＨＯＴＡＩＲ基因表达分　析结果显示胶质瘤组织中ＨＯＴＡＩＲ表达显著高于癌　旁组织。在Ｕ８７胶质瘤细胞、ＨＡ１８００正常胶质细胞　中进行ｑＲＴ—ＰＣＲ验证，结果显示ＨＯＴＡＩＲ在Ｕ８７细　胞中的表达显著高于ＨＡ１８００，与芯片分析的组织结　平可能会抑制Ｔ细胞增殖而减弱其抗肿瘤作用，甚　至有利于肿瘤的进展。有研究报道ＩＦＮ处理肿瘤细　胞可能影响其在体内的转移潜能［８－１￣。本研究发现　７１９　甜融．嘏　习二｝１０ＴＡＨ　嚣ＩＪ∞，７耸爵吕　离遗　茹珊鐾丰Ｈ水夺窜坍　浙江中医药大学学报２０１６年１０月第４Ｏ卷第１０期　１５　一　∞一　０　∞　【ｄ　∞　ｚ　暑＿【　－Ｌ∽　一∞　０一罾０　田譬４。∞《乏　吕＿【ＬＬ　∞　一∞》∞＿【口０　砷　０《ｚ　旨＿【－Ｉ．　ＬＬ∽　【ｌ呈　００　ＰＩ　１０　【１２董０。ＰＩ　一一２　０　ＰＩＳ　∞如∞∞加ｍ　０　∞如∞∞加ｍ　０　５　０　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　ＣＯＢ　１Ｏ　２Ｏ　４０　８０　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍＬ－＇）　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｉｒｇ‘ｍＬ－’）　ｃ０ｎ　１０　２０　４０　８０　Ｚ　昌一　∽　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　一　＿【口０　∞２鱼。　Ｚ　暑＿ｔ　－Ｉ．∽　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ・ｍＬ－）　一　　＿【叠０　∞∞　盘　Ｏ　４　３　２　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘　）　一∞　０一《０　∞　盘０　《ｚ　昌＿【　∽　ｍＬ－（１２ｌｕ００　Ｐ１皂　Ｏ　８　６　４　２　Ｏ　—１０皇　８　ｐ１Ｓ　３　２　ｌ　【１８　００　ｐ１兽　ｌ　Ｏ　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　ｃｏｎ　１０　２Ｏ　４０　８０　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍＬ－）　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ　ｍＬ－’）　图５　ＩＦＮ一０【干预Ｕ８７细胞后ＳＴＡＴ１和ＨＯＴＡＩＲ的表达晴况　Ｆｉｇ．５　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ａｎｄ　ＳＴＡＴ１　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＩＦＮ一　注：ｃｏｎ：正常组。与ｃｏｎ组比较，　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１。　Ｎｏｔｅ：ＣＯＩｌ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎ　ｇｒｏｕｐ．　心０．０５．”尸＜０．０１．　ＩＦＮ对胶质瘤刺激能上调ＨＯＴＡＩＲ基因表达水平，可　调ＨＯＴＡＩＲ的表达可能是通过间接作用，具体机理　还需进一步研究。　参考文献：　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ：　能对胶质瘤具有促进作用。　ＪＡＫ—ＳＴＡＴ通路是ＩＦＮ介导的经典通路，ＩＦＮ通　过激活ＪＡＫ，而活化ＳＴＡＴ１。因此，本研究将ＳＴＡＴ１　的表达水平作为阳性对照，比较分析ＩＦＮ对ＨＯＴＡＩＲ　表达的影响。结果显示，ＩＦＮ—Ｏｆ．、ｐ、＾ｙ干预Ｕ８７细胞均　能上调阳性对照ＳＴＡＴ１的表达量，干预时间越长、浓　度越高表达量增加越显著。ＩＦＮ—ｐ和ＩＦＮ一　干预　【１］Ｄｅ　Ａｎｇｅｌｉｓ　ＬＭ，Ｂｕｒｇｅｒ　ＰＣ，Ｇｒｅｅｎ　ＳＢ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｇｌｉｏｍａ：ｗｈｏ　ｂｅｎｅｉｆｔｓ　ｆｒｏｍ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｎｅｕｒｏｌ，１９９８，４４（４）：６９１—６９５．　［２］ｄｅ　Ｍａｂｅｌ　Ｃ，Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ　Ｓ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ：ｅｓｔａｂ—　Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ的表达量无统计学意义；ＩＦＮ—　ｏｔ干预Ｕ８７细胞后ＨＯＴＡＩＲ的表达量有所增加，干　ｌｉｓｈｅｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｎｅｗ　ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｏｎ—　ｃｏｌ　Ｈｅｍａｔｏｌ，２００９，７０（３）：１８３－１９４．　【３】Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｈ，Ｏｇａｔａ　Ｈ，Ｎｉｓｈｉｇａｋｉ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｏｂａｃｃｏ　ｓｍｏｋｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｌｕｎｇ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ｔｉｇｇｅｒｒｉｎｇ　ＩＫＫ　ｂｅ—　预时间越长、浓度越高表达量增加越显著，表明ＩＦＮ—　通过上调ＨＯＴＡＩＲ的表达参与胶质瘤的发生发展。　另外，与ＳＴＡＴ１的表达水平变化相比较而言，ＨＯ—　ＴＡＩＲ表达量增加并不显著，笔者推测ＩＦＮ一仅干预上　７２０　ｔａ　ａｎｄ　ＪＮＫｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ，２０１０，　１７（１）：８９－９７．　［４］Ｐａｒｋ　ＥＪ，Ｌｅｅ　ＪＨ，Ｙｕ　ＧＹ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｅｔａｒｙ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｏｂｅｓｉｔｙ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ｅｎｈａｎｃｉｎｇ　ＩＬ－６　ａｎｄ　ＴＮＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌ１．２０１０．１４０（２）：　浙江中医药大学学报２０１６年Ｊ０月第４０卷第ｊＯ期　一０｝０一盘０一器譬盘　０　Ｚ　昌一是　１５　誊＿Ｉ目０Ｉｓ∞　ｌｄ０。　ｚ　置＿【　Ｉｓ　３　—　《　器苣８《乏　昌　∽　１０　．昌　２　８　５　Ｏ　ＣＯＩｌ　１０　２０　４０　８０　０　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍＥ－１）　５０　４Ｏ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ’ｍＬ－＇）　３　呈３Ｏ　暑　２０　营２　§　１　ｌ０　０　Ｏ　ＣＯｎ　１Ｏ　２Ｏ　一∞　＿Ｉ　０　∞　０∞　ｚ　吕　《ＪＪ∽　４０　８０　《ｚ　昌＿【－Ｉ．　－Ｉ．∽　１Ｏ　２Ｏ　４０　８０　【ｌ２　０。ｐ１Ｓ　６０　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ＩＴＩ一Ｌｑ）∞　∞一口０　∞兰４　　＿１０　一岛０一∞册　盘０　ＣｏＺ　昌＿ｎｃｅｎｔｒ【ＬａｔＬ《Ｌｉｏｎ（Ｉ．∞　ｎｇ・ｍＬ－）　３　５０　０　２　．岂　４０　３Ｏ　互　８　冒２　善　蚕１　ＣＯＩｌ　１０　２０　４０　８０　Ｓ　２Ｏ　１０　０　ＣＯＩｌ　１Ｏ　２Ｏ　４０　８０　Ｃ０ｎｃｅｎｔｒａｔｉ０ｎ（ｎｇ’ｍＬ－１）　Ｃ０ｎｃｅｎｔｒａｔｉ０ｎ（ｎｇ‘ｍＬ－　）　图６　ＩＦＮ—Ｂ干预Ｕ８７细胞后ＳＴＡＴ１和ＨＯＴＡＩＲ的表达情况　Ｆｉｇ．６　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ａｎｄ　ＳＴＡＴ１　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＩＦＮ—ｐ　注：ＣＯｌｌ：正常组。与ＣＯＩｌ组比较，．Ｐ＜ｎＤ５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１。　Ｎｏｔｅ：ｃｏｎ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎ　ｇｒｏｕｐ．　Ｐ＜Ｏ．０５．　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　１９７—２０８．　［８】罗利群，张友会．　一干扰素促进小鼠乳腺癌的转移【Ｊ】．中　华肿瘤杂志，１９９４，１６（４）：２５１—２５４．　Ｌｕｏ　Ｌｉｑｕｎ，Ｚｈａｎｇ　Ｙｏｕｈｕｉ．Ｇａｍｍａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　【５】任伟，周国平．干扰素调节因子的抑制肿瘤作用［Ｊ】．生命的　化学，２００７，２７￣）：５４１—５４３．　Ｒｅｎ　Ｗｅｉ，Ｚｈｏｕ　Ｇｕｏｐｉｎｇ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃａｎｃｅｒ，　１９９４，１６（４）：２５１—２５４．　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ，２００７，２７（６）：５４１—　甜甜，嘏～淋叫｝｛ｏＴＡＩ　斟姗　吕ＩＪ∞，７酱裔吕　薄诔潜　与＿　吕益　霹窜　５４３．　【９】　Ｂ～ＭｃＭｉｌｌａｎ　ＴＪ，Ｒａｏ　Ｊ，Ｅｖｅｒｅｔｔ　ＣＡ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｉｎ—　ｄｕｃｅｄ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｃａｐａｃｉｔｙ．ｃｌａｓｓ～１　ａｎｔｉｇｅｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｍｅｌａｎｏｍａ　『６】范义湘，罗荣城，方永鑫，等．干扰索一　对乳腺癌细胞　Ｈｅｒ２／ｎｅｕ表达及”。Ｉ—Ｈｅｒｅｅｐｔｉｎ抑制肿瘤细胞增殖的影响　【Ｊ］．癌症，２００６，２５（４）：４４３—４４６．　Ｆａｎ　Ｙｉｘｉａｎｇ，Ｌｕｏ　Ｒｏｎｇｃｈｅｎｇ，Ｆａｎｇ　Ｙｏｎｇｘｉｎ，ｅｔ　ａ１．Ｅｌ－　ｆｅｅｔｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ一＾，ｏｎ　Ｈｅｒ２／ｎｅｕ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｕｍ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，１９８７，４０（５）：６５９—６６３．　［１０】Ｃ—Ｋｅｌｌｙ　ＳＡ，Ｇｓｃｈｍｅｉｓｓｎｅｒ　Ｓ，Ｅａｓｔ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅ—　ｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｂｙ￣／－ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，　１９９１（５１、：４０２０－４０２７．　【１　１】Ｍｅｒｃｅｒ　ＴＲ，Ｄｉｎｇｅｒ　ＭＥ，Ｍａｔｔｉｃｋ　ＪＳ．Ｌｏｎｇ　ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡｓ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｉｎｔｏ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｒｅｖ　Ｇｅｎｅｔ，２００９，１０　ｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｖ　ｏｆ　３’Ｉ—Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ，２００６，２５（４１：４４３—４４６．　【７】曾学清，段功香，蒋湘莲．干扰素在抗肿瘤方面的应用【Ｊ】．中　国生化药物杂志，２００３，２４（４）：２１５—２１７．　Ｚｅｎｇ　Ｘｕｅｑｉｎｇ，Ｄｕａｎ　Ｇｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇ　Ｘｉａｎｇｌｉａｎ．Ｔｈｅ　（３）：１５５－１５９．　［１２】魏婷婷，杨敏，唐晴琴，等．长链非编码ＲＮＡ在免疫炎症反　应中的研究进展ｆＪ１．检验医学，２０１５，１０（３０）：１０４４—１０４７．　Ｗｅｉ　Ｔｉｎｇｉｎｇ，Ｙａｎｇ　Ｍｉｎｇ，Ｔａｎｇ　Ｑｉｎｇｑｉｎ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｎｇ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｅｆｒｅｒｏｎ　ｉｎ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｆｉｅｌｄ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００３，２４（４）：２１５—２１７．　７２１　醋　州｝１０＿ｆＡＨ　斟姗　墨　∞　瞥高墨　霹遗潞　一与　潜潞　盖　萍窜　浙江中医药大学学报２０１６年１ｏ月第４０卷第１ｏ期　一∞盎＿【口０　曲譬４　。《ｚ　暑＿【　《－Ｌ∞　一。　＿【口０　∞￡盘００　ｚ篮吕　《舞　一　毫一　０　∞２盘ｇ《ｚ　昌Ｈ－Ｊ　∽　＿一一２甚０。ｐ１　９　８　７　６　５　４　３　２　１　Ｏ　２　０　一一２ｌＵ００　ｐＩ曼　８　６　４　２　Ｏ　【１２　０　ｐ【逞　∞　∞　∞　加　ｍ　Ｏ　ｃｏｎ　１０　２Ｏ　４０　８０　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ。ｍＬ－　）　３　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍＬ－　）　２　ｃｏｎ　１０　２０　４０　８０　ｃｏｎ　１Ｏ　２０　４０　８０　一。　一　０　∞　４　０《Ｚ　富ＨＣｏｎｃｅｍｒａｔｉ　《－Ｌ∽　ｏｎ（ｎｇ’ｍＬ－　）　∞∞一　∞一　０一　４０∞《ｚ　吕＿【　《－Ｌ∽　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍＬ『　、　【＿　＞∞一目。【ｓ∞。　４　Ｚ　基＿【　《＿Ｌ∽　【ｆ。　０。Ｐｌ　５　４　３　２　１　Ｏ　一一２苫０。ＰＩ　３　２　１　Ｏ　一一２菪０。ｐ１逞　ＣＯｉｌ　ｌ０　２０　４０　８０　ｃｏｎ　１Ｏ　２０　４０　８０　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ　ｍ０’１　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｎｇ‘ｍ　Ｉ１　图７　ＩＦＮ一　干预１５８７细胞后ＳＴＡＴ１和ＨＯＴＡＩＲ的表达情况　Ｆｉｇ．７　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＯＴＡＩＲ　ａｎｄ　ＳＴＡＴ１　ｉｎ　Ｕ８７　ｃｅｌｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＩＦＮ一　注：ｃｏｎ：正常组。与ｃｏｎ组比较，　Ｐ＜０．０５，　．Ｐ＜Ｏ．Ｏ１。　Ｎｏｔｅ：ＣＯｎ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｐ＜Ｏ．０５．”Ｐ＜Ｏ．Ｏ１．　ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｅ　ｅｎｃｈｙｍａｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ　Ｒｅｐ，２０１４，　３２（１）：３９５－４０２．　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　２０１５，１０（３０）：１０４４—１０４７．　【１３】Ｒｉｎｎ儿，Ｋｅｒｔｅｓｚ　Ｍ，Ｗａｎｇ　ＪＫ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｄｅｍａｒ—　ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｓｉｌｅｎｔ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｄｏｍａｉｎｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　［１７Ｊ　Ｃｈｅｎ　ＦＪ，Ｓｕｎ　Ｍ，Ｌｉ　ＳＱ，ｅｔ　ａ１．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｏｎｇ　ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ　ＨＯＴＡＩＲ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ［］］．Ｍｏｌ　Ｃａｒ—　ＨＯＸ　ｌｏｃｉ　ｂｙ　ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００７，１２９（７）：１３１　１—　１３２３．　ｃｉｎｏｇ，２０１３，５２（１　１）：９０８—９１５．　［１８】Ｋｏｇｏ　Ｒ，Ｓｈｉｍａｍｕｒａ　Ｔ，Ｍｉｍｏｒｉ　Ｋ．Ｌｏｎｇ　ｎｏｎ　ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ　ＨＯＴＡＩＲ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｐｏｌｙｃ０ｍｂ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｍｏｄｉｉｆ—　ｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　１５　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｏｌｏｒｅｅ—　［１４Ｊ　Ｗａｎ　Ｙ，Ｃｈａｎｇ　ＨＹ．ＨＯＴＡＩＲ：Ｆｌｉｇｈｔ　ｏｆ　ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡｓ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｃｙｃｌｅ，２０１０，９（１７）：３３９１—３３９２．　【１５】Ｓｈａｈ　Ｎ，Ｓｕｋｕｍａｒ　Ｓ．Ｔｈｅ　Ｈｏｘ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ￣］．Ｎａｔ　Ｒｅｖ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，１０（５）：３６１—３７１．　［１６】Ｗｕ　ＺＨ，Ｗａｎｇ　ＸＬ，Ｔａｎｇ　ＨＭ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｎｇ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ　ＨＯＴＡＩＲ　ｉｓ　ａ　ｐｏｗｅｒｆｕｌ　ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ　ｏｆ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｔａｌ　ｃａｎｅｅｒ￣］．Ｃａｎｅｒ　Ｒｅｓ，２０ｌ　１，７１（２０）：６３２０—６３２６．　（收稿日期：２０１６－－０５—１８）　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ——ｍｅｓ－－　７２２