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2024年6月19日发(作者：)
克隆策略复习题及答案
一、填空题
1.
克隆策略有三层含义：① 采用什么样的技术路线将目的基因中克 隆
出来；②用什么方法将目的基因同载体连接；③通过什么方法 将体外连
接的
DNA
分子导入适当的受体进行扩增或表达。
2.
假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基 本条
件：
①保持正确的可读框；②能够使其转录的启动子；③具有翻译 的起始和
终止信号。
3.
现有的基因克隆策略大体上分为四类：功能克隆、定位克隆、 表型克
隆、电子克隆。
4.
受体细胞的感受态是接受外源
DNA
的生理状态。
5. DNA
重组连接的方法大致分为四种：①黏性末端连接；②平末 端连
接；③同聚物加尾连接；
④接头/连接子连接。
6.
将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组
DNA
克
隆，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个 基因组
DNA
文 库。
7.
将含有一个
mRNA
的
DNA
拷贝的克隆称作一个
cDNA
克隆,源于 同一批
RNA
制备物的克隆群则构建了一个
cDNA
文库。
8.
在构建
cDNA
克隆之前，可以用差示杂交来富集一特殊的核昔酸 序
列。做法是：用来自于能够产生目的蛋白的细胞
mRNA
分子同来自 于另一
类型细胞（不产生这种蛋白质，但亲缘关系密切）的过量
mRNA
分子杂
交。
9.
一旦克隆了一个遗传定位的基因，就可以用染色体步移技术来 鉴定
基因组
DNA
文库中与之相邻的基因克隆。
10.
只要知道基因组中某一特定区域的部分核昔酸组成，用聚合酶 链式
反应
（PCR）
可以将这段
DNA
进行百万倍的扩增。
11. SD
序列是
mRNA
分子中同核糖体
RNA
结合的序列，其结构特征 是
AGGAGG
的全部或一部分。
12.
环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链
DNA
转化效率的
1% o
13. cDNA
技术是进行真核生物基因克隆的一种通用方法，因为它可 以用
mRNA
为模板，通过反转录
合成一个双链的、无内含子的基因，因而有利于在原核细胞中进行 功能
表达。
14.
产生平末端的方法通常有：①平切的酶；②
S1
核酸酶切除黏 性末
端
；③DNA
聚合酶补平黏末端。
15.
人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为
0°C
时吸附
DNA, 42°C
时 摄
入
DNA
。
16.
影响酶切的主要因素之一是底物
DNA,
底物的影响包括
DNA
的浓 度、
DNA
的纯度、
DNA
的二/三级结构、识别位点和邻近的特异性 序列。
17. Sall
是识别
6
个核昔酸的酶，其识别切割的理论值是
4096
个 碱基
就有一个切点，但在哺乳动物中，大约
300kb
才有一个切点。
18.
在精简基因组文库中，用标记的突变体
DNA
同未标记的野生型
DNA
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