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2024年6月26日发(作者：)

Reverse Transcriptase XL (AMV)

使 用 说 明 书

Code No.： D2620

包 装：

Reverse Transcriptase XL（5 U/μl） 200 U

5×Reverse Transcriptase XL Buffer 1 ml

保 存：

-80℃冷冻保存（反复冷冻、融解基本不失活，但应尽量避免），-20℃短期保存亦可。

●

制品说明

本酶是由Avian Myeloblastosis Virus（AMV）分离而来的分子量约157,000道尔顿的αβ型全酶

（E.C.2.7.7.7）。AMV反转录酶XL经过高度纯化，不含核酸酶。该酶在37～55℃的温度范围内有活性，

最适温度为41～45℃，在以Tobacco Vein Mottling Virus（TVMV）RNA（约10 kb）作模板的情况

下，AMV RT XL（200 Units/ml）可使60%的模板被反转录，其中25%被合成为全长的cDNA。以

Poly(A)-tailed RNA Ladder（1.4～9.5 kb）作模板时，可使40～70％的模板被反转录，其中55～80

％被合成为全长的cDNA。与小鼠反转录病毒（MMLV）由来的反转录酶不同，本酶在4 mM焦磷酸钠存

在下也能合成cDNA，但此时的最适温度为37～40℃。

●

酶贮存溶液

KPB缓冲液（pH7.2）

EDTA

DTT

Triton X–100

Glycerol

●

起 源：

Avian myeloblastosis virus（AMV）。

●

活性定义

以Poly(rA)·Oligo(dT)为模板/引物，在37℃、10分钟内，使1 nmol的［

3

H］dTMP掺入酸不溶性沉淀

物所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

10

0.1

2

0.2

mM

mM

mM

%

50 %

●

纯 度

1） RNase Assay

15 U的本酶和1 μg的RNA Ladder（1.4～9.5 kb）在37℃下反应2小时，RNA的电泳谱带不发

生变化。

2） DNase Assay（Endonuclease、Exonuclease）

50 U的本酶和0.5 μg的φX174 RFI DNA

Hae

III fragments在15 μl反应液中，37℃下反应3

小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

●

用 途

1） 合成单链cDNA。

2） 制作cDNA探针。

3） RNA及DNA的双脱氧测序。

4） RNA的PCR反应。

5） 用引物伸长法组建mRNA 5′末端的物理图谱。

6） 双链DNA 3′凹陷末端的修复。

●

添附Buffer组成（保存：-20℃）

5×Reverse Transcriptase Buffer。

Tris-HCl（pH8.3） 250 mM

KCl 375 mM

MgCl

2

40 mM

DTT 50 mM

●

使用例

用于PCR反应的cDNA合成

1. 在微量离心管内配制下列反应液，全量为20 μl。

模板RNA溶液 1 μg

5×Reverse Transcriptase Buffer 4 μl

dNTP Mixture（10 mM each） 2 μl

RNase Inhibitor 20 U

Oligo(dT)

18

Primer

或Random Primer（6～9 mer） 50 pmol

AMV Reverse Transcriptase 10 U

DEPC H

2

O up to 20 μl

2. 轻轻搅拌。

3. 室温放置10分钟后移入42℃恒温槽中。

4. 42℃保温1小时。

5. 在冰水中冷却2分钟。

(所得到的反应液可用于PCR反应。)

V2006.03

本文标签： 反应活性模板冷冻转录

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