重组hIL-10对皮肤移植家兔T细胞凋亡及IL-2的影响

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2024年7月18日发(作者：)

广东医学２０１１年１月第３２卷第１期　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｊａｎ．２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１　

・

３７・　

ｓｅｌａｌｍ—ｆｒｅｅ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ，２００４，２２（７）：　

１２１８一ｌ２３８　

［１５］ＤＡＨＬＳＴＲＡＮＤ　Ｊ，ＬＡＲＤＥＬＬＩ　Ｍ，ＬＥＮＤＡＨＬ　Ｕ．Ｎｅｓｔｉｎ　ｍＲＮＡ　

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｅｎｔｒａｌ　ｎｅｒｖｏｕｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌ　

ｓｔａｔｅ　ｉｎ　ｍａｎｙ，ｂｕｔ　ｎｏｔ　ａｌｌ，ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｃｅｎｔｒａｌ　ｎｅｒｖｏｕｓ　

［１４］ＫＡＬＬＯＳ　Ｍ　Ｓ，ＢＥＨＩＥ　Ｌ　Ａ，ＶＥＳＣＯＶＩ　Ａ　Ｌ．Ｅｘｔｅｎｄｅｄ　ｓｅｒｉａｌ　ｐａｓ—　

ｓａｇｌｎｇ　ｏｆ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｎｅｕｒａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｂｉｏｒｅａｅｔｏｒｓ　

ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ１．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ　Ｄｅｖ　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，１９９５，８４（１）：１０９—１２９．　

（收稿日期：２０１０—０８—１２编辑：张素文）　

［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｅｎｇ，１９９９，６５（５）：５８９—５９９．　

重组ｈＩＬ一１　０对皮肤移植家兔Ｔ细胞　

凋亡及ＩＬ一２的影响术　

李阳飞，王春梅　，孙万邦，张磊，温琼娜，刘凯山　

遵义医学院珠海校区生理学教研室（广东珠海５１９０４１）　

【摘要】　目的探讨重组ｈＩＬ一１０诱导皮肤移植家兔与外周血Ｔ细胞凋亡的关系。方法将１８只受体家兔　

随机分成重组ｈｌＬ～１０实验组［低剂量５　ｇ／（ｋｇ・ｄ）；高剂量１０　（ｋｇ・ｄ）］，ＣｓＡ阳性对照组［低剂量５　ｍｇ／　

（ｋｇ・ｄ）；高剂量１０　ｎｌｇ／（ｋｇ・ｄ）］，ｈＩＬ一１０＋ＣｓＡ联合组［５　ｇ＋５　ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）］，生理盐水阴性对照组（１　ｍＬ／ｄ）　

共６组，每组３只；供体ｌ８只。实验组及对照组均在术前１　ｄ至术后９　ｄ持续肌肉注射药物，并观察各组移植术后　

皮片情况。流式细胞仪检测各组家兔术后１…４　７　１４　ｄ外周血Ｔ细胞凋亡率的变化。用ＥＬＩＳＡ法检测家兔术后１、　

４、７、１４　ｄ血清中细胞因子ＩＬ一２的变化。结果　重组ｈＩ１　一１０组与生理盐水组皮片平均存活时间相比较，存在显　

著性差异（Ｐ＜０．０５）。ｈｌＬ一１０＋ＣｓＡ组皮片存活时间与低剂量重组ｈＩＬ一１０组及低剂量ＣｓＡ组比较有明显差异　

（Ｐ＜０．０５）。重组ｈＩＬ一１０组术后Ｔ细胞凋亡率随着时间逐渐升高，血清ＩＬ一２的水平逐渐降低，与阴性对照组比　

较差异有显著性（Ｐ＜０．０５），其作用呈剂量依赖性；ｈｌＬ一１０＋ＣｓＡ组与单独用药的低剂量重组ｈｌＬ一１０组及低剂　

量ＣｓＡ组相比，外周Ｔ细胞凋亡率升高，血清ＩＬ一２的水平下降，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论　重组ｈＩＬ一１０　

对家兔皮肤移植排斥有抑制作用，延长移植皮片存活时间，其机制可能是通过诱导外周血Ｔ细胞凋亡，下调外周　

血ＩＬ一２水平，实现免疫抑制，或与诱导免疫耐受有关。　

【关键词】　重组人白介素１０；皮肤移植；细胞凋亡；白介素２　

白细胞介素１０（ｉｎｔｅｒｌｅｕｌｉｎ　１Ｏ，ＩＬ一】０）是Ｆｌｏｒｅｎｔｉｎｅ　

科生物技术有限公司），ＩＬ一２　ＥＬＩＳＡ试剂盒（晶天生　

等于１９８９年发现小鼠Ｔｈ２细胞株Ｄ１０．Ｇ４．１产生的一　物公司），５８１０Ｒ方式冷冻离心机（德国ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公　

种抑制Ｔｈｌ细胞株细胞因子ＲＮＡ转录的冈子，称为细　司），流式细胞仪（ＦＣＭ，ＥＰＩＣＳ，ＸＬ美国ＢＤ公司），酶　

胞因子合成抑制因子。随后发现ＩＬ一１０可由多种细　

标仪（Ｂｉｏ—ＴＥＫ公司）。　

胞分泌，如单核细胞、巨噬细胞、Ｔｈ２细胞、Ｂ细胞、肥大　

１．２　方法　

细胞等，并且参与多种细胞的生物调节，是机体重要的　１．２．１　家兔皮肤移植分组将皮肤移植家兔分为６　

免疫调节因子之一，具有抑制免疫活性细胞的激活和　组（见表１）。家兔无菌皮肤移植手术后，缝合固定，单　

细胞因子产生的作用，参与Ｔ细胞免疫反应的调节，抑　

笼饲养，动态观察皮片生长情况并做好记录。移植前　

制Ｔ细胞的激活，诱发Ｔ细胞的无效应答…，诱导Ｔ细　１　ｄ开始用药，持续１０　ｄ。　

胞的免疫耐受。有研究表明ＩＬ一１０和抑制移植排斥　

表１　家兔皮肤移植实验分组及给药　

有密切关系，并具有一定的治疗前景。本文旨在探讨　

重组ｈＩＬ一１０抑制家兔皮肤移植排斥是否诱导了Ｔ细　

胞凋亡，探讨其相关性及其调节机制，为临床移植免疫　

耐受的诱导及免疫抑制剂的合理应用提供理论依据。　

１材料与方法　

１．１　主要试剂与实验仪器健康新西兰白兔（分别为　

供体】８只、受体１８只，体重２　０００～２　５００　ｇ，遵义医学　

院珠海校区实验动物中心提供）。重组ｈＩＬ一１０工程　

１．２．２皮肤移植排斥评价若植皮与宿主背部愈合，　

菌由遵义医学院珠海校区免疫教研室构建　。环孢菌　

色泽一致，炎症和充血不明显，皮片红润、柔软、弹性　

素Ａ（ＣｓＡ，Ｎｏｖａｒｔｉｓ公司），Ａｎｎｅｘｉｎ—Ｖ试剂盒（广州联　

好，皮片紧贴创面，无分泌物，干燥则为未发生排斥；以　

皮片红肿、有水泡、变硬、翘起，发黑或结痂脱落判定为　

贵州省教育厅自然科学研究项目［编号：黔教科（２００８０３２）］　

移植排斥，记录开始出现排斥的时间；以移植皮片面积　

△通信作者。教授；Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｃｈｎ＠ｙａｈｏｏ．ｅｏｆｆ１．ｏｎ　

的８０％出现坏死、发黑视为排斥时间　，移植皮片未　

．

３８．　广东医学２０１１年１月第３２卷第１期　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｊａｎ．２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１　

表２　ＡｎｎｅｘｉｎＶ法检测家兔术后不同时间　

出现完全排斥时间为皮片存活时问，全程观察２８　ｄ。　

１．２．３外周血Ｔ细胞凋亡检测　移植家兔皮肤术后　

１、４、７、１４　ｄ，取家兔外周血，用流式细胞仪检测Ｔ细胞　

凋亡。方法：（１）取２　ｍＬ全血用ＰＢＳ按１：１稀释；（２）　

组别　

ｈｌＬ一１０低剂量纵　

外周Ｔ细胞凋亡率　

术后１　ｔ｛　术后４　ｄ　术后７　ｄ　

（ｉ±５）％　

术后１４　ｄ　

ｌ１．０５±０．７４　３Ｏ．１８±１．８８　３２．４１±２．２４　

２８．０ｏ±４．１　

将稀释后的全血小心加到淋巴细胞分离液上层（勿　

混），２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心８　ｍｉｎ；（３）取单个核细胞层于另　

一

ｈｌＬ一１０高剂量组　

１３　０５±０．９４　３２　４６±３　８７　３６．５６±３．７８　３３．１１±２．９７　

ＣｓＡ低剂量组　

１２．６７±３．８２　３０．２４±３．４　３３．６７±３　４　３Ｏ．１１±４．０９　

试管中，加２　ｍＬ　ＰＢＳ，１　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心５　ｒａｉｎ，弃上清　

ＣｓＡ高剂量组　

１４．８２±３．４０　３６．８５±８．２４　４０．５２±３．１５　３５．５０±０．５３　

液，重复１次；（４）调整细胞浓度１　Ｘ　１０。／ｍＬ，取１００　Ｌ　

细胞液＋ＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＦＩＴＣ　５１　Ｌ及５ｌ　Ｌ　ＰＩ混匀；（５）　

６．６２±４．９６　３６　６０±２．９７　３９．７２±５．８９　３４．３７±３．４　

ｈＩＬ一１０＋ＣｓＡ组　

１

阴性对照组　

８．２３±】．２７　１４．４０±３．０１　ｌ８．３０±１．３３　

ｌ１．２３±１．８２　

避光室温２０　ｍｉｎ；（６）加缓冲液３００　，上流式细胞仪　

分析；（７）采取氩离子激光器（功率１５　ｍＶ）发射的４８８　

ｍｍ波长作为激发光源，细胞获取及分析，ｃｅｌｌｑｕｅｓｔ软　

件下进行。　

１．２．４血清ＩＬ一２检测家兔皮肤移植术后１、４、７、　

１４　ｄ分别采集家兔静脉血，分离血清，作ＩＬ一２检测。　

检测操作严格按ＩＬ一２　ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书进行。　

１．３统计学方法数据用ＳＰＳＳ　ｌ３．Ｏ软件进行统计　

学处理。同一时问点组间比较用ｔ检验，不同时间点　

的组内比较用方差分析，检验水准为０．０５（双侧）。　

２结果　

２．１　术后家兔移植皮片存活时间　生理盐水组在各　

实验组中皮片存活时间最短，皮片平均存活时问为　

（７．６６±１．１５）ｄ。重组ｈＩＬ—ｌ０组家兔术后移植皮片　

柔软，色泽红润，边缘整齐，张力适中，无渗　。直到第　

７天低剂量重组ｈｌＬ一１０组家兔皮片开始由红润逐渐　

变为灰暗、干燥，从周边向中央变硬，边缘逐渐翘起，皮　

片平均存活时间为（１３．３３±３．０５）ｄ；高剂量重组ｈＩＬ一　

１０皮片平均存活时间为（１６．００±２．００）ｄ。重组ｈＩＬ一　

１０组与生理盐水组皮片平均存活时问相比较，差异有　

显著性（Ｐ＜０．０５）。高剂量ＣｓＡ组在用药期间均未　

现排斥坏死现象，皮片平均存活时间为（２１．３３±１．５２）　

ｄ，但受体在用药期问食欲不振，大小便明显减少，毛发　

易脱落，精神状态欠佳，用药停止后好转。重组ｈＩＬ—　

ｌ０组无此现象，考虑与ＣｓＡ的不良反应有关。ｈＩＬ一　

１０＋ＣｓＡ组皮片存活时间较长，为（１９．００±１．７３）ｄ，皮　

片存活时间最长的１只家兔术后第２１天才开始出现　

排斥，皮片存活时间与低剂量重组ｈＩＬ一１０组及低剂　

量ＣｓＡ组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。　

２．２　ＡｎｎｅｘｉｎＶ流式细胞仪检测外周Ｔ细胞凋亡的结　

果重组ｈＩＬ一１０组术后Ｔ细胞凋亡率随着时间逐渐　

升高，在术后第３天明显增加，术后第７天达到高峰；　

与阴性对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。高剂量　

重组ｈｌＬ一１０组术后Ｔ细胞凋亡率较低剂量组明显增　

高；重组ｈｌＬ一１０组与ＣｓＡ组术后外周Ｔ细胞凋亡率　

相比差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；ｈＩＬ一１０十ＣｓＡ组与生　

理盐水阴性对照组比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；ｈＩＬ　

一

１Ｏ＋ＣｓＡ组与单独用药的低剂量重组ｈＩＬ一１０组及　

低剂量ＣｓＡ组相比，外周Ｔ细胞凋亡率升高，差异无显　

著性（Ｐ＜０．０５），见表２。　

２．３血清ＩＬ一２水平ＥＬＩＳＡ检测结果术后各用药　

组家兔血清ＩＬ一２的水平与生理盐水阴性对照组相比　

均有不同程度的降低。重组ｈｌＬ一１０组与生理盐水组　

相比，血清ＩＬ一２水平下降，差异有显著性（Ｐ＜０．０５），　

并且高剂量重组ｈＩＬ一１０组的血清ＩＬ一２水平下降更　

为明显。ＣｓＡ组与生理盐水阴性对照组相比，血清　

ＩＬ一２水平下降，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。重组ｈｌＬ　

一

１０组与ＣｓＡ组相比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。　

ｈｌＬ一１０＋ＣｓＡ组与单独用药的低剂量重组ｈＩＬ一１０组　

及ＣｓＡ组比较，血清ＩＬ一２差异有显著性（Ｐ＜０．０５），　

与阴性对照组比较下降更明显（Ｐ＜０．０５）。各组家兔　

血清ＩＬ一２水平ＥＬＩＳＡ检测结果见表３。　

表３各组家兔术后不同时间血清ＩＬ一２水平　（　±　）Ｐｇ／ｍＬ　

３讨论　

器官移植已成为终末期器官功能衰竭患者唯一且　

有效的治疗手段。但目前困扰器官移植发展的因素　

中，除了供体来源外，移植免疫排斥和长期使用免疫抑　

制剂的不良反应仍是重要的问题。目前，ＣｓＡ联合应　

用糖皮质激素类药物仍为临床控制急性移植排斥反应　

的首选治疗药物，但如何克服二者的毒副作用也是急　

待解决的问题之一。现普遍认为，解决异体移植排斥　

反应的关键在于诱导受体对供体的细胞、组织或器官　

产生免疫耐受。有研究表明，凋亡是机体维持免疫系　

统稳定的重要作用机制。凋亡细胞可以促使相关淋巴　

细胞对其特征性抗原识别激活后产生免疫耐受　。Ｔ　

淋巴细胞是介导异体器官移植排斥反应的主要效应细　

胞。Ｔ细胞的凋亡提示机体的免疫系统受到抑制，使　

免疫应答处于低反应或不反应状态，从而产生免疫耐　

受，延长移植物存活时间。有研究表明，外周Ｔ细胞凋　

亡在诱导Ｔ细胞耐受和延长移植物生存方面有重要作　

用　。ＩＬ一１０具有抑制免疫活性细胞的激活和细胞因　

广东医学２０１１年１月肇３　ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃ—ａｌ　！！！！　竺．　！！，　！　：　：　！：！　．３９．　

子产生的作用，抑制Ｔｈｌ细胞亚群合成细胞因子　研究表明，ＩＬ一２缺陷小鼠对共刺激信号的阻断所诱导　

ＴＮＦ～　、ＩＬ一２、ＩＬ一４、ＩＦＮ一－ｙ等，诱导Ｔｈｌ向Ｔｈ２转　

变，改变Ｔ细胞亚群及诱导同种特异性耐受的作用。　

ＢＡＣＨ等　最先提出了移植排斥反应发生时细胞因子　

向Ｔｈｌ型偏移的学说，而在耐受状态下，Ｔｈｌ细胞活性　

降低，表现为ＩＬ一２和ＩＦＮ一　的表达下降。ＩＬ一１０与　

移植排斥反应有密切关系，并具有一定的治疗前景。　

目前移植模型和临床应用中往往用逆转录病毒、腺病　

毒甚至脂质体介导的ｖＩＬ一１０基因转染作为基因治疗　

手段。在皮肤移植中，郑江红等　研究发现成纤维细　

胞介导的ＩＬ一１０基因疗法显著延长异体皮肤移植的　

存活时间，并降低小鼠淋巴细胞的增殖反应，减少ＩＦＮ　

—　

、

ＩＬ一２的产生及降低ＮＫ细胞活性。最近有研究　

表明，ＩＬ—ｌ０修饰的ＤＣＳ能诱导对胰岛移植的免疫耐　

受，延长胰岛移植物的存活时问，主要是因为ＩＬ—ｌ０　

能诱导Ｔ细胞凋亡及抑制Ｔｈｌ型细胞介导的同种异体　

免疫　。　

Ｔ淋巴细胞的大量凋亡必定会引起参加自身免疫　

反应的效应性Ｔ细胞数量的减少，从而使得免疫反应　

的程度减轻。本研究表明，重组ｈｌＬ一１０抑制组的家　

兔皮肤移植术后早期外周血存在较多的凋亡淋巴细　

胞，而生理盐水对照组在发生急性排斥反应中，淋巴细　

胞凋亡不活跃。术后各组家兔皮片存活时间比较，重　

组ｈＩＬ一１０抑制组皮片存活时问比生理盐水对照组明　

显延长，提示初始淋巴细胞凋亡在免疫耐受的形成过　

程中发挥重要作用，限制了免疫反应，维持了对于同种　

异体移植皮肤的免疫耐受，说明重组ｈＩＬ～１０能诱导Ｔ　

淋巴细胞凋亡。外周Ｔ淋巴细胞凋亡的分子机制有两　

种：一种是死亡受体介导的凋亡，即活化Ｔ淋巴细胞上　

可表达大量的死亡受体蛋白（如Ｆａｓ、ＩＦＮ—Ｒ１、ＤＲ６　

等），当受体受到刺激时可通过胞内死亡结构域启动信　

号转导通路，最终导致细胞的凋亡；细胞因子撤退诱导　

的死亡是外周Ｔ淋巴细胞凋亡的另一个重要机制，这　

些细胞因子主要是ＩＬ一２和大量相关因子如ＩＬ～４、ＩＬ　

一

７等在体内外均能促进Ｔ细胞生存　。当这些细胞　

因子被抑制时，细胞对凋亡就更加易感。卒实验结果　

表明，重组ｈｌＬ一１０组家兔术后血清ＩＬ一２含量与生理　

盐水阴性对照组相比有明显下降，而外周Ｔ细胞凋亡　

率明显增高，冈此我们初步推测，重组ｈｌＬ～１０诱导外　

周Ｔ淋巴细胞凋亡的机制可能是通过抑制血清ＩＬ一２　

的表达。然而，我们发现重组ｈｌＬ～１０组、ＣｓＡ组及二　

者的联合用药组家兔术后血清ＩＬ～２含量虽较生理盐　

水阴性对照组有明显下降，但在受体的淋巴细胞发生　

较多凋亡时，这些受体血清内ＩＬ一２浓度稍为升高，说　

明术后３～５　ｄ　ＩＬ一２在淋巴细胞中表达上调。这一发　

现也支持与淋巴细胞活化相关的免疫耐受诱导机　

制　。Ｊ。从某种意义看是自相矛盾，因为ＩＬ一２一直以　

来被认为是Ｔ细胞生长因子，能促进Ｔ细胞增殖和分　

化，并使活化Ｔ细胞转化为效应Ｔ细胞。但近年来有　

的免疫耐受能够产生抵抗，这种抵抗与同种异体抗原　

介导的Ｔ细胞凋亡机制受损有关　。在ＩＬ一２或功能　

性ＩＬ一２受体缺陷型小鼠，Ｔ细胞耗竭机制有缺陷，结　

果在外周堆积的活化Ｔ细胞越来越多，于是就增加这　

种小鼠对白体免疫性疾病的易感性　。有研究报道，　

ＩＬ一２在体内的主要作用是使活化Ｔ细胞对Ｆａｓ介导　

的凋亡更敏感　。最近有研究报道，过表达外源性ＩＬ　

一

４和ＩＬ—ｌ０的基因治疗能够诱导心脏移植免疫耐　

受，主要是因为这种基因治疗策略通过Ｆａｓ／ＦａｓＬ的相　

互作用，能促进同种异体移植后活化Ｔ淋巴细胞凋亡，　

同时防止心肌细胞凋亡　。一个活化Ｔ细胞凋亡所　

采取的路径很可能由几种因素决定，这些因素包括涉　

及的Ｔ细胞亚群、Ｔ细胞活化的机制以及活化Ｔ细胞　

所处的微环境。因此，重组ｈＩＬ～１０诱导外周Ｔ细胞凋　

亡的机制不单是通过抑制ＩＬ一２产生的途径，受体介　

导的凋亡及它们之间的相互作用可能都发挥着作用。　

是否一种特定的凋亡途径在其中处于支配地位，还需　

要进一步研究。　

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［１１］ＤＡＩ　Ｚ，ＫＯＮＩＥＣＺＮＹ　Ｂ　Ｔ，ＢＡＤＤＯＵＲＡ　Ｆ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｐａｉｒｅｄ　ａｌ－　

・

４０・　广东医学２０１１年１月第３２卷第１期　ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｊａｎ．２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１　

ｓｉｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ＣＩＭ　Ｔ（：ｅｌｌｓ・ＩＬ一２Ｒ　ａｌｐｈａ　ａｎｄ　ＩＬ一２　ｓｈａｐｅ　ａ　

ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｇｕｌａｔｕｒｙ　ｃｅｌｌｓ　ｔｈａｔ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　ＣＤ４’Ｔ　ｃｅｌｌ　ｎｕｍｂｅｒｓ　

ｌｏａｎｔｉｇｅｎ——ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｌｏｎｇ——　

ｔｅｎｎ　ａｌｌｏｇｒａｆｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ＩＩ　一２一ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｍｎｍｎｏｌ，　

１９９８，ｌ６１（４）：１６５９—１６６３　

［Ｊ］．Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，ｔ６９（９）：４８５０—４８６０．　

［１２　ｊ　ＳＡＤＬＡＣＫ　Ｂ，ＬＯＨＩ　Ｅｌｌ　Ｊ，ＳＣＨＯＩＩＬＥ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　ａｕｔｏ—　

ｉｍｍｕｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉＪ１——２——ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｎｌｉｃｃ　ｉｓ　ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ　ｂｙ　

［１４　Ｉ　ＦＵＲＵＫＡＷＡ　Ｈ，ＯＳＨＩＭＡ　Ｋ，ＴＵＮＧ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｅｘ—　

ｏｇｅｎｏｕｓ　ＩＩ　一４　Ａｎｄ　ｌＩ　一１　０　ｐａｒａｄｏｘｉｃａｌｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ａｌｌｏｇｅｎｉｅ　Ｔ—　

ａｎ　ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎ（１　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ４　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　　ＩＪ］．　

ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｃａｒｄｉａｃ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＦＡＳ／ＦＡＳＬ　ｐａｔｈｗａｙ　

Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９５，２５（１１）：３０５３—３０５９．　

［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００８，８５（３）：４３７—４４６．　

［１３］ＡＬＭＥＩＤＡ　Ａ　Ｒ，ＬＥＧＲＡＮＤ　Ｎ，ＰＡＰＩＥＲＮＩＫ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｈｏｎｌｅｏｓｔａ—　

（收稿日期：２０１０—０７—２２编辑：蔡欣）　

重组人白介素１　０对低氧条件下人单核细胞凋亡　

变化规律的影响水　

姚君　，王立生　，王建尧　，李迎雪　，朱惠明　，师瑞月　，张茹　，莫镜　，张利国　

暨南大学第二临床医学院、广东省深圳市人民医院消化内科（广东深圳５１８０２０）；　广东省深圳市儿童医院　

（５１８０２０）；　广州医学院第三附属医院（广州５１０１５０）；４广东省　山市第二人民医院肝胆外科（５２８０００）　

【摘要】　目的研究低氧条件下，重组人白介素１０（ｒｈｌＬ—ｌｏ）对人单核细胞白细胞（ＴＨＰ一１）凋亡和ｃａｓｐａｓｅ一３　

活性变化规律的影响。方法　悬浮培养ＴＨＰ一１细胞株，分为正常对照组（常规培养）；低氧（５％０　，５％ＣＯ　，　

９Ｏ％Ｎ，）培养ＴＨＰ一１，ｒｈＩＬ—ｌ０以１０、５０、Ｊ００．ｇ／ｍＬ的浓度干预，分为低氧对照组，ｒｈｌＬ一１０低、中、高剂量干预　

组；培养１２、２４、４８、７２　ｈ，离心收集细胞，化学比色法检测细胞核内ｃａｓｐａｓｅ一３活性，４８　ｈ核荧光染色荧光显微镜　

观察，分析荧光强度，行统计学分析。结果　凋亡蛋白ｃａｓｐｓｅ一３相对活性，１２　ｈ各组差异无统计学意义（Ｐ＞　

０．０５）；２４　ｈ低氧对照组及低、中剂量ｒｈＩＩ　一１０干预组与正常对照组比较升高（Ｐ＜０．０５），高剂量ｒｈＩＬ一１０干预组　

与正常对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），ｒｈＩＬ一１０干预各组与低氧对照组比较降低（尸＜０．０５）；４８　ｈ低氧　

对照组和ｒｈｌＬ一１０干预低、中、高剂量组与正常对照组比较升高（Ｐ＜０．０５），低、中、高剂量ｒｈｌＩ　一１０干预组与低　

氧对照组比较明显降低（Ｐ＜０．０５）；７２　ｈ低氧对照组、低剂量ｒｈＩＬ一】０干预组与正常组比较升高（Ｐ＜０．０５），其余　

各组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；缺氧凋亡峰值见于４８　ｈ。取４８　ｈ行各组凋亡细胞核Ｈｏｅｅｈｓｔ荧光染色，灰度　

值分析低氧对照组和低、中、高剂量ｒｈＩＬ一１０干预组与正常对照组比较升高（Ｐ＜０．０５）；低、中、高剂量ｒｈｌＬ一１０　

干预组与低氧对照组比较降低（Ｐ＜０．０５）。结论缺氧可促进单核细胞凋亡，ｒｈｌｌ　一１０可一定程度地抑制人单核　

细胞凋亡，这些变化可能与各器官急性缺氧性疾病有密切相关性。　

【关键词】　重组人白介素１０；低氧；凋亡；人单核细胞；ｅａｓｐａｓｅ一３　

缺血缺氧是许多疾病中常见的病理现象，可造成　

１材料与方法　

单核细胞凋亡和坏死，从而影响单核细胞许多重要乍　

１．１　材料人单核细胞门细胞（ＴＨＰ一１）由南方医科　

理功能和免疫功能的发挥。同时，缺氧导致器官功能　

大学细胞生物学教研室邹志鹏老师馈赠。重组人白介　

损害，除与细胞能量代谢障碍、代谢性酸叶ｌ毒有关外，　

还可能与炎症细胞被激活、炎症因子大量释放有关。　

素１０（ｒｈＩＬ一１０）购于上海欣百诺生物科技有限公司，　

ＩＬ一１０主要由ＣＩＭ　Ｔｈ，辅助细胞亚群产生，以单体形　

编号：（ＳｉｎｏＢｉｏ—Ｃ０２７）。试剂：ＣＣＫ一８试剂盒、Ｈｏ—　

式发挥作用，是细胞免疫反应中最为重要的负性调节　

ｅｃｈｓｔ一３３２５８试剂盒和ｃａｐａｓｅ一３凋亡检测试剂盒购　

因子…。它能下调Ｔ细胞和　噬细胞转录分泌的　

于南京凯基生物科技有限公司；ＢＣＡ蛋白定量试剂盒　

ＴＮＦ—　、ＩＬ一１Ｂ、ＩＬ一６和ＩＬ一８等细胞因子，最终抑　

（上海申能博彩生物科技有限公司）；ＲＰＭＩ　１６４０（ＰＰＡ，　

制Ｔ细胞介导的细胞免疫反应。【大１此，有抗凋亡作用　

Ａｕｓｔｒｉａ）；无内毒素胎牛血清（ＧＩＢＣＯ）。　

的ＩＬ一１０对单核细胞可能有保护作用。本实验以厌　

１．２　方法　

氧培养单核细胞建立缺氧模型，研究在缺氧条件下，　

１．２．１　细胞培养将ＴＨＰ一１常规培养２　ｄ，细胞浓度　

ｒｈｌＬ一１０对单核细胞凋亡的影响及作用途径，以进一　

调整到５　ｘ　１０　・ｍＬ。　

步阐明ｒｈｌＬ一１０治疗缺血缺氧疾病的机制，也为其用　

１．２．２低氧处理、药物干预与实验分组正常对照组　

于治疗新的适应证提供线索。　

行常规有氧培养；低氧（５％Ｏ：，５％ＣＯ：，９０％Ｎ：）培养　

组分为低氧对照组，ｒｈｌＬ一１０干预组分为低、中、高剂　

广东省自然科学基金资助项目（编号：１０１５１８０２００１０００００２）　

量组（分别以ｒｈｌＬ一１０　１０、５０、１００　ｎｇ／ｍＬ的终浓度于　

△通信作者。博士研究生导师，主任医师；电话：０７５５　

培养基培养）；以上组别培养ｌ２、２４、４８、７２　ｈ后，行相　

２５５３３０１８；Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｌｓ１６８＠１６３．Ｃｏｒｎ　

关检测。　

本文标签： 细胞凋亡移植皮肤排斥