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2024年6月2日发(作者：)
文件名称：Pan T磁珠分选标准操作规程
文件编号：SOP-
版本/修订号：A/0
文件类型： SOP
起草部门：
起草人员：
起草日期：
发布日期：
颁发部门：
1. 目的
为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。
2. 范围
适用于T细胞分选生产的操作过程。
3. 职责
3.1 生产部负责操作和清场。
3.2 质量管理部QA负责监督。
4. 仪器、试剂和耗材
4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS)
4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清；
4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管；
5. 标准操作程序
5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。
5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰
箱预冷。全程保持低温。
5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。将分离器平行贴到支撑架
的垂直面上，移动分离器调整高度。取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。
5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。
5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。
5.6 按照每10
7
细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。
5.7 每10
7
细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。
5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。
5.9 每10
7
细胞加30ul 缓冲液。
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文件名称：Pan T磁珠分选标准操作规程
文件编号：SOP-
版本/修订号：A/0
5.10每10
7
细胞加20ul Pan T Cell Microbead。
5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。
5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。
5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。
5.14 把细胞悬液加入到柱子中。收集流出的T细胞。
5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。与5.14的合并。
5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。
5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。
5.18 取样，台盼蓝染色后在细胞计数仪上计数。
5.19 关闭生物安全柜，进行清场操作。
5.20 填写相关记录文件。
6. 相关文件
无
7. 相关记录
7.1《T细胞分选生产记录》
8. 附件清单
无
9. 修订历史
内容
版本/修订号
生效日期
第 2 页
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